饶氏无绿藻探针法荧光定量PCR试剂盒 返回列表页

实验过程：
一、饶氏无绿藻探针法荧光定量PCR试剂盒试剂准备
1. DNA模板
2．产品仅用于科研对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
参数规格：
产品名称：饶氏无绿藻探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Prototheca zopfii
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

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产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒探针法荧光定量保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
以下是公司正在热销的产品：
Syringin叶检测试剂盒20mg

竹节香附素A(标准品) 质量规格：HPLC≥98%，标准品 Raddeanin A SMMC-7721(人肝细胞)腊状芽胞杆菌 Bacillus cereus

Ginsenoside Rh2开环氨曲南标准品规格：规格：人低氧诱导因子1β(HIF-1β)Polyclonal Antibody 0.2ml

人Apelin12oxLDL  氧化低密度脂蛋白抗体规格:96T/48TBemotrizinol Impurity Mixture规格:25mgα2巨球蛋白检测试盒20mg人视网膜色素上皮细胞，D407细胞1x10^6cells

CiwujianosideB叶受体α检测试剂盒20mg

双氢青蒿素  英文名称：Dihydroartemisinin   保存：-20℃   规格：50mg 化原癌基因c-Raf抗体

Ginsenoside Rh3盐巴氨西林标准品规格：规格：人锌α2糖蛋白(ZAG)Polyclonal Antibody 0.2ml

人活化蛋白CFSIP1  纤维性鞘结合蛋白1抗体规格:96T/48TBenazepril Hydrochloride规格:200mgα2抗纤溶酶检测试盒20mg人视网膜上皮细胞，ARPE19细胞1x10^6cells

97%5g25g胶原酶mitogen activited protein kinase 8

 肌原纤蛋白1(FBN1)重组蛋白英文名称：Recombinant Fibrillin 1 (FBN1)

GAD65 (glutamate decarboxylase)  谷氨脱羧酶65(抗原)进口、原装雄激素结合蛋白检测试盒5gHuman/人Elisa试盒5001183

97%25g100g胶原酶Bile salt  dependent lipase

三环唑标准溶液(10μg/ml,u=2%) 质量规格：10μg/ml,u=2% Tricyclazol solution

GAP43 ( Growth associated protein43 )  生长相关蛋白43（抗原）现货供应热休克蛋白90α检测试盒5gHuman/人Elisa试盒500221

96%1g500g胶原酶diamine oxidase

 乙酰辅酶A羧化酶α(ACACα)重组蛋白英文名称：Recombinant Acetyl Coenzyme A Carboxylase Alpha (ACACa)

NAC Agar Medium假单胞菌属分离培养细胞信号转导分子3检测试盒20mg前列环素检测试盒ProstaglandinE2
饶氏无绿藻探针法荧光定量PCR试剂盒氨曲南1(3Chlorophenyl)pip hydrochlo...5G通用试剂

氨曲南（标准品）Oxysophocarpine,98%1G通用试剂

巴卡丁 IIIOxysophoridine,98%1G通用试剂

巴卡丁 III（标准品）Aloperine,98%1G通用试剂

巴氯芬DMAPAA,98%5G通用试剂

巴氯芬(标准品)2Cyanobenzoic acid,88%1G通用试剂

巴洛沙星(标准品)3Pyridinesulfonic acid,≥98.0%5G通用试剂

巴洛沙星Ammonium metatungstate hydrate,≥99.0%25G通用试剂

盐达莫司汀1,1,3,3Tetramethylguanidine,99%5ML通用试剂

盐达莫司汀（标准品）2,6Dimethoxyphenol,99%25G通用试剂

倍他米松Cholera toxin from Vibrio cholerae0.5MG通用试剂

倍他米松（标准品）2Sulfobenzoic anhydride,98%25G通用试剂

比阿培南3,5Difluoropyridine,97%1G通用试剂

比阿培南（标准品）Indoxyl acetate,≥95%1G通用试剂

胆红素(标准品)Isovanillic acid,97%5G通用试剂
使用方法：
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DN段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好。