卡氏肺孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒 返回列表页

实验过程：
一、卡氏肺孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒试剂准备
1. DNA模板
2．产品仅用于科研对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
参数规格：
产品名称：卡氏肺孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Pneumocystis carinii
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

​
产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒探针法荧光定量保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
以下是公司正在热销的产品：
98%25g25g12羟基异补骨脂酚126801589Macrophage ColonyStimulating Factor

 小鼠胎儿真皮成纤维细胞*培养基100mL

phloridzin阿托伐他汀相关物质D标准品规格：规格：人α1微球蛋白/bikunin蛋白前体(AMBP)ELISA试剂盒 0.2ml

人CCL26KRIT1  脑海绵状血管畸形蛋白1抗体规格:96T/48T规格:200mgTARDNA结合蛋白43检测试盒20mg人乳腺癌细胞，HS578T细胞1x10^6cells

Punicalagin胰岛素自身抗体检测试剂盒20mg

氧化苦参碱 质量规格：≥98%,BR Oxymatrine

胰岛素样生长因子2(IGF2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 IL6ST / gp130 / CD130 蛋白*250(g)

人CCL3HPV16 L2  人乳头瘤病16型L2抗体规格:96T/48T规格:200mgTau蛋白检测试盒20mg人乳腺癌细胞，MCF7细胞1x10^6cells

99%25g1g脂肪酶（猪胰）very low density lipoprotein cholesterol

克螨特标准溶液(1.00mg/ml) 质量规格：1.00mg/ml Propargite solution

Tween80 Medium(Fungi)油的真菌无菌试验丝氨肽酶抑制子Kazal型1检测试盒20mg胶原酶I检测试盒Cytokeratin16

四基罗丹明6马来酰亚（单一化合物）5mg

 Toll样受体4(TLR4)重组蛋白英文名称：Recombinant Toll Like Receptor 4 (TLR4)

Fungi Agar生物制品真菌无菌检验氧化应激反应诱导凋亡蛋白检测试盒20mg角蛋白16检测试盒connectivetissuegrowthfactor

四基罗丹明5马来酰亚（单一化合物）5mg

三杀虫酯标准溶液(10μg/ml,u=2%) 质量规格：10μg/ml,u=2% Plifenat solution

Rose Bengal Agar生物制品真菌、酵母菌计数唾液淀粉酶检测试盒20mg结缔组织生长子检测试盒Haptoglobin
卡氏肺孢子虫探针法荧光定量PCR试剂盒獐牙菜苷 CAS号： 14215862 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

乌金苷 CAS号：  规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

重楼皂苷VII CAS号： 76296758 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

重楼皂苷VI CAS号： 55916513 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

鼠尾草 CAS号： 5957802 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

重楼皂苷II CAS号： 76296725 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

重楼皂苷I CAS号： 50773416 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

小白菊内 CAS号： 20554841 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

瑞香素 CAS号： 486351 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

葫芦巴碱盐盐 CAS号： 6138416 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

槐角碱 CAS号：  规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

香紫苏 CAS号： 515037 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

羟红花黄色素A CAS号： 78281024 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

断血流皂苷A CAS号： 916347314 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询

大叶茜草素 CAS号： 55481884 规格： HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
使用方法：
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DN段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好。