雷氏普罗威登斯菌探针法荧光定量PCR试剂盒

雷氏普罗威登斯菌探针法荧光定量PCR试剂盒是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。

【产品名称】雷氏普罗威登斯菌探针法荧光定量PCR试剂盒
【英文名称】Providencia rettgeri
【产品编号】YSP7116
【包装规格】50T
【预期用途】
产品仅用于科研本产品可用于肉及肉制品中鸭源性成分的定性检测，所用仪器为实时荧光PCR仪，可通过实时扩增曲线判断样品中是否存在鸭源性成分。
【检验原理】
本试剂盒采用实时荧光PCR技术，针对鸭源性成分核酸序列设计特异性引物和荧光探针，通过实时荧光一步法RT-PCR（Taqman探针法）对鸭源性成分核酸进行定性检测。
优越的扩增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及优化的反应体系保证更高的扩增效率。以相同量的293T细胞cDNA为模板，扩增β-actin基因，与同类产品相比，UNICONTM qPCR Master Mix扩增信号更强，扩增效率更高。
​
PCR实验方法步骤：
雷氏普罗威登斯菌探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	5   min	1
变性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
终延伸	72℃	5   min	1

实验步骤：
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
Protopanaxatriol胰蛋白酶检测试剂盒20mg

 SKIRROW氏培养基基础/空肠弯菌培养基基础/Skirrow Medium Base用于空肠弯菌的分离培养250克国产/进口

Ginsenoside Rd巴芬标准品规格：规格：人重组醛糖还原酶(AKR1B1)Polyclonal Antibody 0.2ml

ADMA(Human asymmetrical dimethylarginine) ELISA Kit  人不对称二基精氨CAS号：1450959NADP苹果脱氢酶检测试盒1KUHuman/人Elisa试盒3140736

Protopanaxdiol胰蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒20mg

利那洛肽 质量规格：>98%,BR Linaclotide

Ginsenoside- Rf巴芬相关物质A标准品规格：规格：人脂联素受体蛋白1 Polyclonal Antibody 0.2ml

ST(Human Serotonin) ELISA Kit  人血清素/血清胺CAS号：1450959甘油醛脱氢酶检测试盒200UHuman/人Elisa试盒3140930

98%250mg500g胶原酶inhibitory subunit of nuclear factorkappa B

 HL-7702(人肝正常细胞)5×106cells/瓶×2

Gastrin  胃泌素（抗原）*Krueppel样子4检测试盒1gHuman/人Elisa试盒500221

≥97%(HPLC)1g100g胶原酶Minichromosome Maintenance Deficient 2

阿克泰(分析标准品,98%) 质量规格：分析标准品,98% Thiamethoxam

AMACR/P504S(alphamethylacylCoA racemase)  α基酰基辅酶A消旋酶抗原进口、分装精子顶体酶检测试盒25gHuman/人Elisa试盒50033

DABCYL 20mg

 MV3(人黑色素瘤细胞)5×106cells/瓶×2

GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein)  胶质纤维性蛋白（抗原）进口、原装犬狂犬病IgG抗体检测试盒5gHuman/人Elisa试盒50033
雷氏普罗威登斯菌探针法荧光定量PCR试剂盒卡那替尼βNaphthoflavone250MG通用试剂

卡培他滨2,5Diaminotoluene sulfate,97%25G通用试剂

卡培他滨（标准品）1Vinyl2pyrrolidinone,≥99%10G通用试剂

卷曲1Vinyl2pyrrolidinone,≥99%100ML通用试剂

卷曲(标准品)Polylactic acid,Mw ~60,0001G通用试剂

卡立普多4′Hydroxy3′methoxyacetophenone,98%25G通用试剂

卡立普多（标准品）EDTA,3Na,≥98.0%25G通用试剂

卡维地洛Sodium thiomethoxide,95%1G通用试剂

卡维地洛（标准品）3Acetyldeoxynivalenol,98%1MG通用试剂

西地尼布9Aminoacridine hydrochloride monohydr...5G通用试剂

塞来昔布，塞内昔布，赛利克西3Pyridylacetic acid hydrochloride,98%1G通用试剂

塞来昔布，塞内昔布（标准品）Sodium 2oxobutyrate1G通用试剂

盐金,盐氯四环素Sphingomyelin,≥97.0%25MG通用试剂

盐金(标准品)NAcetyl4piperidone5G通用试剂

西洛他唑2Methylresorcinol,≥98.0%25G通用试剂
荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
产品仅用于科研其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。