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供货周期 | 现货 | 规格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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货号 | GOY-01D282 | 应用领域 | 化工 |
主要用途 | 仅供科研实验 | 英文名称 | Recombinant?Glucokinase?(GCK) |
物种 | Rattus?norvegicus?(Rat,大鼠) |
蛋白表达及纯化:
1.培养500ml哺乳动物细胞,然后将重组质粒转染到细胞中,通过瞬时表达产生目标蛋白。
2.收集含有目标蛋白的部分(细胞或培养上清)。
3.通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
4.通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
5.通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
交付内容:纯化好的目标蛋白及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签(Tag)或切除纯化标签(Tag)的最终蛋白,纯度最高可达90%以上。
产品属性:
产品名称 | 物种 | 货号 |
葡萄糖激酶(GCK)重组蛋白大鼠 | Rattus norvegicus (Rat,大鼠) | GOY-01D282 |
英文名称:Recombinant Glucokinase (GCK)
GK; GLK; HHF3; HK4; HKIV; HXKP; MODY2; Hexokinase-D; Hexokinase 4; Maturity Onset Diabetes Of The Young 2
型号:GOY-01D282
酶与激酶
代谢通路
内分泌学
营养代谢
物种:Rattus norvegicus (Rat,大鼠)
来源:原核表达
宿主E.coli
内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定)
亚细胞定位::细胞核, 细胞质
预测分子量:54.1kDa
实际分子量:54kDa(差异分析请参阅说明书)
片段与标签:Asp194~Gly410 with N-terminal His and GST Tag
缓冲液成份:20mM Tris, 150mM NaCl缓冲液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性状:冻干粉
纯度:> 90%
等电点:4.5
应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
规格10μg50μg200μg1mg5mg
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操作步骤:
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
2. 每100mg固体组织置于培养皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
107个 | 0.5 mL~1 mL |
5×106个 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃摇床平台上,温和振荡15 min;
6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
公司正在出售的产品:
睫状神经营养因子抗体 CNTF
柯萨奇病毒A16型聚合酶3D Cox A16 polymerase3D
细胞角蛋白16抗体 CK16
4号染色体开放阅读框17抗体 C4orf17
细胞质脆性X智力低下蛋白结合蛋白2抗体 CYFIP2
胸腺基质淋巴细胞生成素受体抗体 CRLF2
细胞角蛋白12抗体 CK12
半γ合成酶抗体 Ceramide glucosyltransferase
补体C2抗体 Complement C2
造血干细胞抗原CD133抗体 CD133
细胞表面趋化因子受体3抗体 CXCR3
内毒素受体抗体 CD14
葡萄糖激酶(GCK)重组蛋白大鼠费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium frediiAsPC-1(人胰腺细胞)
杆菌属 Lactobacillus sp.棒杆菌 Corynebacterium glutamicum
T/G HA-VSMC(人血管平滑肌细胞)小鼠树突状细胞肉瘤细胞
球孢白僵菌 Beauveria bassianaNEC(人食管细胞)
IMR-32(人神经母细胞瘤细胞)胰(含10mL 酶解缓冲液)
胶韧革菌植物杆菌 Lactobacillus plantarum
苜蓿中华根瘤菌宇佐美曲霉 Aspergillus usamii
毛柄金钱菌(金针菇) Flammulina velutipesMCF-7 [MCF7], 人腺细胞系
酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
人胚肺成纤维样细胞人成骨肉瘤细胞
酸球菌脂亚种 Lactococcus lactis subsp. cremoris5637(人膀胱细胞)
保加利亚杆菌 Lactobacillus bulgaricus人脐动脉平滑肌细胞
大豆慢生根瘤菌酸球菌亚种 Lactococcus lactis subsp. lactis
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