WISH (羊膜细胞) (Hela污染细胞系) 返回列表页

冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

产品属性：

名称    WISH (羊膜细胞) (Hela污染细胞系)
别称 Wistar Institute, Susan Hayflick

年龄（性别） 女

组织来源 起源HeLa细胞污染

生长特性 贴壁细胞

细胞形态 上皮细胞样

背景描述 最初以为，WISH细胞的起源是正常羊膜，但随后通过同工酶分析、HeLA标记染色体和DNA指纹法分析，WISH细胞的起源是HeLa细胞污染的。WISH细胞角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性。注意：WISH细胞包含HeLa标记染色体，是从HeLa污染细胞中建株的。

生物安全等级 2

生长培养基 MEM＋1mM Sodium Pyruvate＋10% FBS＋1% P/S

推荐传代比例 1:2-1:4

推荐换液频率 2~3次/周

冻存条件

冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度：液氮

培养条件

气相：空气，95%；CO2，5%

温度：37℃

抗原表达情况 The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.

基因表达情况 The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining. The cells and tumors formed from the cells are positive for Dopa decarboxylase and are negative for the TAG-72 antigen.

保藏机构 ATCC; CCL-25 ATCC; CRL-7727 ECACC; 88102403

培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
Denhardt 溶液，50×100mL  甲酰胺，PCR 级5mL

鲑鱼精 DNA 溶液1mL  加 T 试剂盒50 次

鲱鱼精 DNA 溶液1mL  加 A 试剂盒50 次

小牛胸腺 DNA 溶液1mL  即用型长片段 PCR 试剂盒20 次

荧光尺1个  即用型荧光定量 RT-PCR 试剂盒50 次
大鼠3-硝基(3-NT)elisa检测试剂盒

大鼠3-羟基-3-甲基戊二酰A合酶(HMGCS)elisa检测试剂盒

大鼠3-O-甲基多巴(3-OMD)elisa检测试剂盒

大鼠Ⅱ型胶原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)elisa检测试剂盒免费代测

大鼠Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)elisa检测试剂盒
WISH (羊膜细胞) (Hela污染细胞系)大鼠Rho鸟苷酸交换因子7(Arhgef7/Pak3bp/Pixb)elisa分析检测试剂盒

大鼠Rho鸟苷酸交换因子7(Arhgef7/Pak3bp/Pixb)elisa检测试剂盒

大鼠Rho鸟嘌呤核苷酸交换因子7(ARHGEF7)elisa检测试剂盒

大鼠Rho相关GTP结合蛋白RhoE elisa分析检测试剂盒

大鼠Rho相关GTP结合蛋白RhoE elisa检测试剂盒免费代测
实验报告：
产品仅用于科研一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。