293T/17 (胚肾细胞) 返回列表页

培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

产品属性：

名称    293T/17 (胚肾细胞) (STR鉴定正确)
别称 HEK 293T/17; 293T/17

种属 人类

年龄（性别） 胎儿

组织来源 肾

生长特性 贴壁细胞

细胞形态 上皮细胞样

背景描述 293T/17细胞株是293T细胞株的衍生株，293T是293 [HEK-293]细胞株插入了SV40 T-antigen的温度敏感基因形成的高转衍生株。293T细胞进行克隆，检测pBND和pZAP载体，得到一株能生成高滴度感染逆转录病毒的衍生株293T/17细胞。293T/17细胞持续表达猿病毒40(SV40)大T抗原，而因其高转染能力筛选到17号克隆。293T/17细胞用pCRIPenv-和pCRIPgag-2载体转染得到ANJOU65细胞株，ANJOU65细胞再用pCRIPgag-2和pGPT2E载体转染得到亲宅性外壳表达细胞株BOSC 23。ANJOU65细胞用携带gpt抗性基因的pCRIPAMgag载体转染得到Bing双向性表达包装细胞株。

生物安全等级 2

生长培养基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S

推荐传代比例 1:3-1:4

推荐换液频率 2~3次/周

冻存条件

冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度：液氮

培养条件

气相：空气，95%；CO2，5%

温度：37℃

注意事项 该细胞贴壁松散，操作时请尽量轻柔；换液时需预热培养基；收货如有大块脱落的细胞团，为正常现象，请按照收货注意事项处理。

保藏机构 ATCC; CRL-11268

实验报告：
产品仅用于科研一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1%和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
Superoxide dismutase( 抗氧化酶 )2mg  96 孔板 PCR 片段纯化回收试剂盒 ( 离心法 )1次

TLR4 激活剂2mL  6nt 随机引物，0.5μg/μL5μg

Tocopherol( 抗氧化剂 )2g  6nt 随机引物 ( 抗水解 )，0.5mM100μL

Trequinsin(PDE III 抑制剂 )2mg  5-Fluorouracil(5- 氟脲嘧啶 )1mL

Trichostatin A(HDAC 抑制剂 )100μg  5-FITC1g
胶体金标记的兔抗大鼠IgM

胶体金标记的羊抗豚鼠IgG

胶体金标记的羊抗小鼠IgM

胶体金标记的小鼠抗兔IgM

胶体金标记的兔抗羊IgM
293T/17 (胚肾细胞)大鼠分泌型免疫球蛋白A sIgA elisa检测试剂盒

大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)elisa分析检测试剂盒

大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)elisa检测试剂盒

大鼠分泌性白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)elisa检测试剂盒

大鼠封闭蛋白3(CLDN3)elisa检测试剂盒

冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。