小鼠阴道壁成纤维细胞 返回列表页

冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

产品属性：

名称    小鼠阴道壁成纤维细胞
2.组织来源：阴道组织

3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

小鼠阴道壁成纤维细胞分离自阴道组织；阴道位于膀胱、尿道和直肠之间，是一个富有弹性的管状器官。它在人类生殖过程中具有多种生理功能，是连接子宫与外阴的通道，是排出月经血、娩出婴儿的必经之路，也是一个重要的性交器官。阴道壁按组织学由外到内分三层，即黏膜层、肌层和外膜。1）黏膜层由上皮和固有膜组成。上皮较厚，为复层鳞状上皮，从基底层到表层由基底层、旁基底层、中间层和表层组成。没有角化层。阴道粘膜的基底层呈细波纹状起伏。2）肌层由平滑肌组织构成，肌束排列不规则，纵行和环形互相交错。肌束间有较多的结缔组织和弹性纤维。阴道外口有环形的横纹肌称括约肌。3）外膜层为纤维膜，由结缔组织构成，内含丰富的弹性纤维、静脉丛、淋巴管和神经。大鼠阴道壁成纤维细胞主要分离自外膜层，成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。

5.方法简介：

公司实验室分离的小鼠阴道壁成纤维细胞采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测：

公司实验室分离的小鼠阴道壁成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传2-3代左右；2代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
威尔氏李斯特菌   酵母

榆干侧耳、大榆磨   乙型副伤寒沙门菌冻干粉

改良马丁琼脂培养基90mm   硝基还原假单胞菌

指状青霉   香港洛克氏菌

苏云金芽胞杆菌托马诺夫亚种 Bacillus thuringiensis subsp. toumanoffii   扇形平菇、扁形平菇
人β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)elisa分析检测试剂盒

人β4整合素(ITG β4/CD104)elisa分析检测试剂盒

人β2转铁蛋白(β2TF)elisa分析检测试剂盒

人β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)elisa分析检测试剂盒

人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)elisa分析检测试剂盒
小鼠阴道壁成纤维细胞小鼠多巴胺转运蛋白(DAT)elisa检测试剂盒

小鼠多功能蛋白聚糖(VS)elisa检测试剂盒

小鼠多功能肽酶2(LMP2)elisa检测试剂盒

小鼠多聚蛋白2(MMRN2)elisa检测试剂盒

小鼠多聚免疫球蛋白受体(PIGR)elisa检测试剂盒
实验报告：
产品仅用于科研一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。