荷斯坦奶牛胎儿成纤维细胞；Human Cell line 1D3说明书 返回列表页

荷斯坦奶牛胎儿成纤维细胞；Human Cell line 1D3说明书【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称 荷斯坦奶牛胎儿成纤维细胞；Human Cell line 1D3说明书
形态特性  成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性  该细胞属专利保藏，其特征特性尚未公开。 
培养条件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
传代方法  1:3传代，3-4天传1次
传代情况 C4
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR 
同工酶 
染色体 
使用权限 未定

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

Dami(人巨核细胞白血病细胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠肤成纤维样细胞    英文名称：        MouseS    
Acc-2(人涎腺腺样囊性细胞)    5×106cells/瓶×2            
透明质酸酶(含10mL酶解缓冲液)    1mL            
3.5% NaC1葡萄糖磷酸盐胨水发酵管    BR    国产/进口    20支    
人肾细胞    英文名称：        Ketr-3    
O157显色培养基配套平皿/大肠杆菌O157显色培养基配套平皿/O157 Chromogenic Medium Dish        国产/进口    9㎝/块    
人间充质干细胞-脐带                
副溶血性弧菌增菌液    副溶血性弧菌的增菌培养    国产/进口    250克    
猴胚胎肾上细胞    英文名称：        Marc145    
马铃薯葡萄糖琼脂/PDA琼脂/Potato Dextrose Agar    霉菌分离培养和霉菌酵母菌计数    国产/进口    250克    
NCI-H2227(人小细胞肺细胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
人支气管上细胞    英文名称：        BEAS-2B    
猪胆盐/Bile salt from pig    BR，65%    国产/进口    25/1000克    
肺腺    英文名称：        GLC-82    
米勒-海顿肉汤/MH肉汤/酪蛋白肉汤/水解酪蛋白肉汤/MHB    用于抗菌素药物敏感性试验    国产/进口    250克    
大鼠骨髓基质细胞*培养基    100mL            
无菌鸡血清/Sterile Defidrinated Chicken Blood    BR    国产/进口    100/400毫升    
SW 982(人滑膜肉瘤细胞)    5×106cells/瓶×2 100U    胆固醇酯酶    
100 T    GSH—ST 测试盒    
丁酰胆碱酯酶    CAS9001-08-5    500U
驴抗山羊 IgG，碱性磷酸酶标记    131148-60    60μL
柱式血液 RNAout    71202-50    50 次
10g    N ,N- 双 (2- 羟乙基 ) 甘氨酸    
250 mL    4% 多聚甲醛 (RNA )    
5mL    平滑肌细胞生长因子    
5次    ECL 法地高杂交检测试剂盒    
前脂肪细胞生长因子    21-0280-5     5mL
RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.5    80918-100    100mL
100U    Pfu DNA 聚合酶    
500 次    BCA 法蛋白定量试剂盒    
20mg    L-Canavanine(iNOS 抑制剂 )    
30mL    天净沙核酸浓缩剂    
L-Glutathione (reduced form)( 抗氧化剂 )    23-0400-1    1g
柱式植物 DNAout    60602-50    50 次
10mL    RNA  DEPC ( 焦碳酸二乙酯 )    
2 μg    Cre/Lox 系统载体系列    
5mL    dNTP 溶液，100mM     
1个    4mL DNA 离心超滤管 (9-15 KD)    
荧光法死细胞检测试剂盒    140633-1000    1000 次
氨基磁珠    130515-2    2mL