Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；231-Cas9-552* 返回列表页

Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；231-Cas9-552*操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。

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细胞名称
形态特性  上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性  该细胞是采用慢病毒感染的方式使MDA-MB-231细胞稳定表达Cas9-Flag-Puromycin，经2ug/ml嘌呤霉素筛选得到的单克隆，经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白，可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。 
培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；2ug/ml Puromycin
传代方法  1:2~1:4传代；每周2~3次。
传代情况 C3
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR  Amelogenin：x,x；CSF1PO：12,13；D12S391：17,18；D13S317：13,13；D16S539：12,12；D18S51：11,16；D19S433：11,14；D21S11：30,33.2；D2S1338：20,21；D3S1358：16,16；D5S818：12,12；D6S1043：18,18；D7S820：8,9；D8S1179：13,13；FGA：22,23；Penta E：11,11；TH01：7,9.3；TPOX：8,9,13；vWA：15,18；
同工酶 
染色体 
使用权限 A类
运输保存：
采用干冰保存运输。收到细胞时，若干冰已经*融化，请立即将细胞复苏培养；若尚留有干冰，请立即将细胞放入液氮中保存待用，请按条件贮存细胞，切不可将细胞置于高温环境。
保存条件：4℃保存一年;-20℃长期保存
用途：只可用于科研。
储存：液氮。
运输：干冰(第二代培养末期液氮冻存)。
细胞一般2-3天更换一次培养基，这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一，周三，周五更换培养基。
注意：*次植入后，在6-16小时内更换培养基，以去除残留的二甲基亚枫和死亡细胞。到达客户手中，出现任何问题（人为或者非人为），导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。对于细胞的真实性，支持客户检测对应的biomarker，（如证明细胞错误，全额退款。）公司针对每株细胞，鉴定gene background，鉴定完成的细胞可以提供数据，用于证明细胞的真实性，并且帮助客户更多的了解细胞特性。

氯化血红素1g
抑肽酶2mg
碱性磷酸酶测试剂盒48 T
CAS9002-09-9酪氨酸脱羧酶25U
100807-100杜氏 PBS 缓冲液 ,10×100mL
130843-50分枝杆菌 RNAout50 次
萘啶酮酸5g
8- 环戊基 -1,3- 二丙基黄嘌呤25mg
Congo Red 100mg
蜗牛酶干粉5g
22-0160-100DAF-FM DA(NO 荧光探针 )100 次
17- μL RNase-free 蓝吸头 ( 盒装 )100 支
葡激酶100μg
百万碱基真菌 DNAout10 次
Sodium Butyrate(HDAC 抑制剂 )1g
末端脱氧核苷转移酶 (TdT)500U
23-0740-1Spermidine.trihvdrochloride(nNOS 抑制剂 )1g
60707-250细菌 DNAout250 次
RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.5100mL
超敏化学发光（HRP）检测试剂盒 2.0 250mL
RNase-free DTT 溶液 ,1M10mL
盐酸万古霉素溶液 ,50mg/mL10mL
18-0110-50NF-κB 激活－核转运检测试剂盒50 次
101208-100DNA  Tris HCl，1M，pH9.0100mLEthyl pyruvate丙酸乙酯617-35-6
Sodium 3-(pyridin-2-yl)-1,2,4-triazine-5,6-diyl]bis(benzene-4,4'-sulphonate) hydrate菲啰嗪69898-45-9
ISOSTEARIC ACID异硬脂酸2724-58-5
(ETHYLENEDINITRILO)TETRAACETIC ACID, TRISODIUM SALT HYDRATE乙四乙酸三85715-60-2
Dimethyl fumarate富马酸二酯624-49-7
GADOLINIUM金属钆7440-54-2
DI-T-BUTYLCYCLOHEXYLPHOSPHINECyclohexyldi - T型丁基膦436865-11-1
N,N-DIETHYL-P-PHENYLENEDIAMINE SULFATE二乙基对硫酸6065-27-6
N-ACETYLMURAMIC ACIDN-乙酰胞壁酸10597-89-4
2-Bromo-2',4'-difluoroacetophenoneα-溴代-2,4-二乙102429-07-2
1-Hydroxy-2,3-dimethylbenzene2,3-二酚526-75-0
Octanoyl chloride酰111-64-8
2-Phenylacetoacetonitrile2-基乙酰基乙4468-48-8
2-Amino-4-chloro-5-methylbenzenesulfonic acid2-氨基-4--5-基磺酸88-51-7
11-(1-Piperazinyl)-dibenzo[b,f][1,4]thiazepine dihydrochloride11-嗪-二并[b,f][1,4]硫氮杂卓酸111974-74-4
L(-)-Camphorsulfonic acidL-(-)樟脑磺酸35963-20-3
(S)-(+)-3,3-Dimethyl-2-butylamine(S)-3,3-二基-2-丁胺22526-47-2
Secondary carbon primary amine extraction agent仲碳伯胺萃取剂
Gabapentin-lactam3,3'-亚基-4-丁内酰胺64744-50-9
L-Methionine methyl ester hydrochlorideL-蛋氨酸酯酸2491-18-1