Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；231-Cas9-551图片 返回列表页

Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；231-Cas9-551图片【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
细胞名称 Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；231-Cas9-551图片
形态特性  上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性  该细胞是采用慢病毒感染的方式使MDA-MB-231细胞稳定表达Cas9-Flag-Puromycin，经2ug/ml嘌呤霉素筛选得到的单克隆，经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白，可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。 
培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；2ug/ml Puromycin
传代方法  1:2~1:4传代；每周2~3次。
传代情况 C3
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR  Amelogenin：x,x；CSF1PO：13,13；D12S391：17,18；D13S317：13,13；D16S539：12,12；D18S51：11,16；D19S433：11,14；D21S11：30,33.2；D2S1338：20,21；D3S1358：16,16；D5S818：12,12；D6S1043：18,18；D7S820：8,9；D8S1179：13,13；FGA：22,23；Penta E：11,11；TH01：7,9.3；TPOX：8,9；vWA：15,18；
同工酶 
染色体 
使用权限 A类
细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
质量保证:    
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。   细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。
操作步骤：
1）贴壁细胞传代：提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热，用75%酒精擦拭后再放入超净台内，吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞，加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，37℃孵育，每隔2~3min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用，用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。
2）悬浮细胞传代：将细胞悬液转移到无菌离心管内，1000rpm离心5min，弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液，将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置37℃温箱培养。

接头 DNA(pSma I)5nmol
CAS9004-54-0葡聚糖50g
12-206Rosetta-gami B(DE3) 菌种1mL
一步法 96 孔板质粒 DNAout( 离心法 )1次
JM110 感受态细胞10×100μL
鱼精蛋白硫酸盐1g
乙烯乙二醇200mL
CAS51-35-4L- 羟基脯氨酸5g
60210-10硫酸链霉素溶液 ,50mg/mL10mL
印迹膜抗体稀释液100mL
聚乙二醇 8000250g
次黄嘌呤1g
MMLV 逆转录酶 (H-)1000U
CAS69-57-8青霉素 G 盐1g
131070-1牛血清白蛋白标准品，2mg/mL1mL
重组蛋白 G1mg
LBA4404 农杆菌菌种1mL
葡萄糖 -6- 磷酸脱氢酶1000U
双染细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V- 荧光素 555·7-AAD）50 次
CAS29915-38-63- 三 ( 羟甲基 ) 甲基 -3- 氨基丙烷磺酸10g
80812-250考马斯亮蓝 G-250 染液250mLBOC-D-SER-OMEBOC-D-丝氨酸酯95715-85-8
4-Chlorophenyl isocyanate对异酸酯104-12-1
BUTADIENE MONOXIDE环氧丁烷930-22-3
Diethylene glycol dibenzoate二酸二甘醇酯120-55-8
1-Methylimidazole1-基咪唑616-47-7
CI 42755胺兰(水溶)28631-66-5
AMMONIUM POLYSULFIDE多硫化铵12259-92-6
SILICON NITRIDE氮化硅12033-89-5
Solvent Red 109溶剂红10953802-03-2
Liriopeside B山麦冬皂苷B182284-68-0
3-(N,N-Dimethylpalmitylammonio)propanesulfonate3-磺丙基十六烷基二甜菜2281-11-0
4-Iodophenetole对碘699-08-1
Lithium sulfate monohydrate一水硫酸锂10102-25-7
DIETHYL BENZYLPHOSPHONATE二乙基苄基膦酸酯1080-32-6
Ginsenoside Rd人参皂甙 Rd52705-93-8
1-ALLYL-3-METHYLIMIDAZOLIUM CHLORIDE化1-丙基-3-基咪唑65039-10-3
NA甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
AMBERLITEAMBERLITE IRA402 CL阴离子交换树脂52439-77-7
NA裨士麦棕Y
Methyl DL-mandelateDL-扁桃酸酯4358-87-6
1,3-BIS(DICYCLOHEXYLPHOSPHINO)PROPANE1,3 -双（二环己膦基）丙烷103099-52-1
TIN锡7440-31-5
2-Ethylhexyl bromide溴代异烷18908-66-2
3-BROMOPROPIONITRILE3-溴2417-90-5
α- 酮戊二酸5g