Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；231-Cas9-548* 返回列表页

Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；231-Cas9-548*操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。

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细胞名称
形态特性  上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性  该细胞是采用慢病毒感染的方式使MDA-MB-231细胞稳定表达Cas9-Flag-Neo，经400ug/mlG418筛选得到的单克隆，经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白，可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。 
培养条件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；400ug/ml G418
传代方法  1:2~1:4传代；每周2~3次。
传代情况 C3
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR  Amelogenin：x,x；CSF1PO：12,13；D12S391：17,18；D13S317：13,13；D16S539：12,12；D18S51：11,16；D19S433：11,14；D21S11：33.2,33.2；D2S1338：20,21；D3S1358：16,16；D5S818：12,12；D6S1043：18,18；D7S820：8,9；D8S1179：13,13；FGA：22,23；Penta E：11,11；TH01：7,9.3；TPOX：8,9；vWA：15,18；
同工酶 
染色体 
使用权限 A类
运输保存：
采用干冰保存运输。收到细胞时，若干冰已经*融化，请立即将细胞复苏培养；若尚留有干冰，请立即将细胞放入液氮中保存待用，请按条件贮存细胞，切不可将细胞置于高温环境。
保存条件：4℃保存一年;-20℃长期保存
用途：只可用于科研。
储存：液氮。
运输：干冰(第二代培养末期液氮冻存)。
细胞一般2-3天更换一次培养基，这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一，周三，周五更换培养基。
注意：*次植入后，在6-16小时内更换培养基，以去除残留的二甲基亚枫和死亡细胞。到达客户手中，出现任何问题（人为或者非人为），导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。对于细胞的真实性，支持客户检测对应的biomarker，（如证明细胞错误，全额退款。）公司针对每株细胞，鉴定gene background，鉴定完成的细胞可以提供数据，用于证明细胞的真实性，并且帮助客户更多的了解细胞特性。

131222-100咪唑溶液，2M100mL
柱式细菌 RNAout50 次
磷脂酶 A21mg
玉米蛋白25g
1000 μL RNase-free 蓝吸头 ( 袋装 )1000 支
CAS9010-66-6玉米蛋白25g
130570-1000植物 Actin 小鼠单抗1000μL
3060-250非冻型组织 RNA 保存液250mL
咪唑10g
200μLRNase-free 黄吸头 ( 盒装已灭菌带芯 )96 支
粪便 DNAout30 次
醛基磁珠2mL
D005-1DNA Oligo 合成服务1 base
130558-10Rosetta(DE3)pLysS 感受态细胞0.1mL×10
小鼠抗 SUMO 标签蛋白单抗100μL
甲叉双丙烯酰胺25g
阿利新蓝 8GX1g
NcoI200U
干粉型 TB 培养基250g
23-0220-5Decitabine 地西他滨5mg
60912-1.5非酶 RNA 清除剂 2.01.5mLGALLIUM(III) NITRATE HYDRATE酸镓69365-72-6
2,5-Dihydro-1H-pyrrole hydrochloride2,5-二氢吡咯酸63468-63-3
Neoandrographolide穿心莲新苷27215-14-1
S-Methyl-L-cysteineS-基-L-半胱氨酸1187-84-4
1,3-Dimethoxybenzene间二151-10-0
H-ALA-2-CLTRT RESINH-ALA-2-CHLOROTRITYL RESIN
3-Methyl-3-methoxybutanol3-氧基-3-基丁醇56539-66-3
L-Rhamnose monohydrate鼠李糖6155-35-7
CIS-5-NORBORNENE-EXO-2,3-DICARBOXYLIC ANHYDRIDE顺-5-降冰片-外型-2,3-二酸酐2746-19-2
Tetraallyltin四丙基锡7393-43-3
1,1-DICHLOROETHANE1,1-二乙烷75-34-3
Succinonitrile丁二110-61-2
H-D-Glu-OBzl1-苄基 D-谷氨酸酯79338-14-0
DL-TyrosineDL-酪氨酸556-03-6
Semisolid Nurient Ag半固体营养琼脂
Sodium 2,4-dichlorophenoxyacetate2,4-二氧乙酸2702-72-9
(HEPTADECAFLUORO-1,1,2,2-TETRAHYDRODECYL)TRIMETHOXYSILANE十七癸基三氧基硅烷83048-65-1
(S)-(-)-Methyl 2-chloropropionate(S)-(-)-2-丙酸酯73246-45-4
1,4-Dioxane1,4-二氧六环123-91-1