Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；MCF7-Cas9-544* 返回列表页

Cas9稳定表达的人乳腺癌细胞；MCF7-Cas9-544*操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。

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细胞名称
形态特性  上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性  该细胞是采用慢病毒感染的方式使MCF7细胞稳定表达Cas9-Flag-Puromycin，经2ug/ml嘌呤霉素筛选得到的单克隆，经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白，可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。 
培养条件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS；2ug/ml Puromycin
传代方法  1:3~1:6传代；每周2~3次。
传代情况 C3
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR  Amelogenin：x,x；CSF1PO：10,10；D12S391：18,20；D13S317：11,11；D16S539：11,12；D18S51：14,14；D19S433：13,14；D21S11：30,30；D2S1338：21,23；D3S1358：16,16；D5S818：11,12；D6S1043：12,18；D7S820：8,9；D8S1179：10,14；FGA：23,25；Penta E：7,12；TH01：6,6；TPOX：9,12；vWA：14,15
同工酶 
染色体 
使用权限 A类
运输保存：
采用干冰保存运输。收到细胞时，若干冰已经*融化，请立即将细胞复苏培养；若尚留有干冰，请立即将细胞放入液氮中保存待用，请按条件贮存细胞，切不可将细胞置于高温环境。
保存条件：4℃保存一年;-20℃长期保存
用途：只可用于科研。
储存：液氮。
运输：干冰(第二代培养末期液氮冻存)。
细胞一般2-3天更换一次培养基，这取决于细胞生长的速度。许多细胞培养实验室通常在周一，周三，周五更换培养基。
注意：*次植入后，在6-16小时内更换培养基，以去除残留的二甲基亚枫和死亡细胞。到达客户手中，出现任何问题（人为或者非人为），导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。对于细胞的真实性，支持客户检测对应的biomarker，（如证明细胞错误，全额退款。）公司针对每株细胞，鉴定gene background，鉴定完成的细胞可以提供数据，用于证明细胞的真实性，并且帮助客户更多的了解细胞特性。

12-253Stb13 菌种1mL
一步法大提质粒 DNAout5次
肌球蛋白100mg
甲基橙5g
考马斯亮蓝 G-25010g
CAS68-94-0次黄嘌呤1g
80807A-50动物细胞裂解液 A50mL
荧光染色细胞凋亡检测试剂盒200 次
聚乙烯醇100g
D- 甘露醇250g
TMB 法生物素杂交试剂盒5次
CAS91079-38-8牛肉蛋白胨500g
131122-10考马斯亮蓝 R-25010g
猪胆盐25g
Lillie 甲醛中性固定液250 mL3-Chloro-2-methylaniline3--2-基胺87-60-5
Phthaloyl amlodipine邻二酰基氨地平88150-62-3
2-Ami,3,5-triazine2-氨基-1,3,5-三嗪4122/4/7
Z-ASP(OTBU)-OSUN-苄氧羰基-L-天冬氨酸 4-叔丁酯 1-(N-琥珀酰亚胺)酯3338-32-7
N,N,N',N'-Tetramethylchloroformamidinium hexafluorophosphateN,N,N',N'-四基脒六磷酸94790-35-9
TRIMETHYL(PENTAFLUOROPHENYL)SILANE三基五基硅烷1206-46-8
Acorus gramineus, ext.石菖蒲油91745-11-8
6,7,8-TRIMETHOXYCOUMARIN白蜡树素6035-49-0
Dihexadecyldimethylammonium bromide双十六烷基二基溴化铵70755-47-4
TITANIUM OXYSULFATE硫酸氧钛123334-00-9
FMOC-D-ALA-WANG RESINFMOC-D-ALA-WANG RESIN
N-(tert-Butyldimethylsilyl)-N-methyl-trifluoroacetamideN-(特丁基二基硅)-N-基三乙酰胺77377-52-7
ASTRAGALIN紫云英甙480-10-4
Methyl 1,2,4-triazole-3-carboxylate1,2,4-三氮唑-3-羧酸酯4928-88-5
12-Crown-412-冠-4294-93-9
Zinc nitrate hexahydrate六水酸锌10196-18-6
2-Sulfobenzoic anhydride2-磺基酸酐1981/8/3
Methyl trifluoromethanesulfonate三烷磺酸酯333-27-7
TRIMYRISTIN甘油三肉豆蔻酸酯555-45-3
1,2-Bis(triethoxysilyl)ethane1,2-二(三乙氧基硅基)乙烷16068-37-4
1-TETRADECANESULFONIC ACID SODIUM SALT十四烷基硫酸6994-45-2
Bispyribac-sodium双草125401-92-5
Platinum dioxide无水氧化铂1314-15-4
Cuprous bromide溴化亚铜7787-70-4
L- 乳酸脱氢酶 ( 兔肌 )2.5ku
活/死细胞染色试剂盒（Calcein AM·PI）1000 次
CAS7365-44-8N- 三 ( 羟甲基 ) 甲基 -2- 氨基乙烷磺酸5g
130877-1可逆性铜染试剂盒1套
α-Tubulin 小鼠单抗1000μL