MMP-2-MMP-9 明胶酶谱法检测试剂盒 返回列表页

本试剂盒采用凝胶反相酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9 活性及其无活性前体酶原谱系。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制备含有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶，含蛋白酶的样

品在此凝胶中进行电泳，电泳时SDS与样本中的MMP可逆性结合，导致MMP氢键和疏水键破坏而不能发挥分解明胶的作用。电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育，MMP恢复活性，凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色

而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶谱及活性，检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行25-50次标准小胶检测（如果样本MMP含量高，孵育时间短，不用换液可最多50次），如果小胶加样孔为10~15个，则总计可最多检测500~750个样品。

检测目的:

本试剂盒用于检测组织、细胞中MMP-2、MMP-9 酶谱活性及其前体酶原酶谱。

MMP-2-MMP-9 明胶酶谱法检测试剂盒说明：

1. 10 mM EDTA能够完-全抑制MMP活性。

2. 凝胶干燥：可使用聚丙烯酰胺凝胶干胶装置室温快速干燥凝胶，作为永-久记录保留。

3. 本试剂盒仅供科研实验使用，不得用于食用、临床医疗等其它用途。

4.实验操作中，请穿戴好实验服、防护口罩和一次性实验手套，避免直接接触。严禁入口。

MMP-2-MMP-9 明胶酶谱法检测试剂盒染色步骤：

1. 此染色液即为工作液，使用时直接将聚丙烯酰胺凝胶放在培养皿中以考马斯亮蓝染色液覆盖凝

胶，并缓慢摇动2h；

2. 倾去染色液，用脱色液冲洗凝胶；

3. 以脱色液覆盖凝胶，缓慢摇动2h，倾去脱色液，再加入新脱色液进行脱色，直至出现透亮区域，此透亮

区域为 MMP 条带的位置。（通常此过程需要 2～4h，也可脱色过夜至出现清晰透亮条带和干净的背景）；

4. 对凝胶进行分析和照相，凝胶可放置在7％的乙酸中保存。也可用凝胶干胶装置对凝胶进行处理后保存。

说明：

A. 染色液含有甲醇，呈酸性，具有轻微腐蚀性，请穿戴好实验服和一次性实验手套，不要直接接触。

严禁入口。使用完成后，请密封保存；

B. 脱色液配方：冰醋酸:甲醇:水＝7:5:88（V:V:V）；

C. 保存液：7％冰醋酸；

D. 凝胶染色之后，染色液可以回收利用，装入新容器内，4ºC保存，可反复使用2-3次。