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Labelfree非标记定量

服务介绍：

　　蛋白质组学(Proteomics)指的是大规模、高通量地研究一个细胞、组织或物种中表达的全套蛋白质的学科。近十年来，质谱技术的飞速发展大大推动了的蛋白质组学的进步，基于质谱的蛋白质组学已经成为蛋白质研究领域的技术手段。通过蛋白质组学技术可以对生物样本中的蛋白质、翻译后修饰位点(如磷酸化)进行大规模地鉴定或定量，进而从高通量的数据分析中挖掘有价值的信息和规律，为功能机制的探究提供线索和基础。2003年，人类基因组计划(HGP)完成精细图的绘制后，同年，人类蛋白质组学计划(HPP)随即开展起来，反映了科研领域对蛋白质组学的重视。经过十年时间，多家单位的共同努力下，人类蛋白质组草图也于2014年在Nature杂志公布了。

　　蛋白质非标记定量技术(Label-Free)是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析，无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准，只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据，比较不同样品中相应肽段的信号强度，从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。其原理是通过比较质谱分析次数或质谱峰强度来分析不同来源样品蛋白的数量变化，其认为肽段在质谱中被捕获检测的频率与其在混合物中的丰度成正相关，因此蛋白质被质谱检测的计数反映了蛋白质的丰度，通过适当的数学公式可以将质谱检测计数与蛋白质的量联系起来，从而对蛋白质进行定量。

　　Label-Free定量技术常用于研究不同病理条件下或者不同发育阶段的组各类样品中蛋白质表达水平的差异，发现生物标记物等。

　　实验流程：

　　蛋白提取—蛋白酶解—肽段富集—高分辨质谱检测采集数据—数据库检索—数据分析

　　送样运输要求：

　　1、蛋白样本

　　①蛋白量大于100ug，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②建议测定蛋白浓度后，液氮速冻，避免蛋白降解，另外需要告知蛋白溶液的缓冲液成分和浓度，方便实验室收到后进行后续处理。

　　③胶条、胶点样本不建议进行定量蛋白质组学。

　　2、细胞样本

　　①细胞量1x10⁷个，收集细胞沉淀，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②收集时，用预冷PBS缓冲液清洗三次，去除培养基成分，然后离心去除上清保存。

　　3、血清样本

　　①样本量500uL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②样本应尽量避免溶血。

　　4、血浆样本

　　①样本量500uL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②样本应尽量避免溶血。

　　5、尿液样本

　　①样本量2mL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②样品应尽量避免带入粪便残渣。

　　6、动物组织样本

　　①样本量300mg，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②收集时，用预冷PBS缓冲液冲洗表面血液，并用滤纸吸干多余水分，避免冻存时结冰。

　　③固定液浸泡过的样本无法进行检测。

　　7、植物组织样本

　　①样本量500mg，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②收集时，用预冷PBS缓冲液冲洗表面泥沙，并用滤纸吸干多余水分，避免冻存时结冰。

　　③固定液浸泡过的样本无法进行检测。

　　8、微生物样本

　　①样本量干重200mg，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。

　　②收集时，用预冷PBS缓冲液清洗三次，去除培养基成分，然后离心去除上清保存。

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