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Gel Red(10000×)
一、产品概述
Gel Red是溴化乙锭(Ethidium bromide,EB)的升级换代产品,主要用于凝胶中DNA、RNA等核酸的染色。它具有安全(致突变性极低且检测不到显著的细胞毒性)、灵敏度高、稳定性好等优点。凝胶中的核酸在使用Gel Red染色后用适当紫外灯(约300nm波长)检测会呈现红色荧光,适用于原先使用EB为染料的凝胶成像系统。
二、产品特点
安全性:Gel Red在远高于其工作浓度范围时均没有细胞毒性及诱变性。艾姆斯氏试验(Ames test)结果表明,Gel Red的诱变性远小于EB。EB在多种致突变测试中呈现很强的诱变性,而Gel Red仅仅在浓度高达20微克/毫升时,并在S9代谢活化时有非常微弱的诱变性。通常Gel Red在凝胶中的工作浓度约为2微克/毫升,大大低于可导致诱变的浓度。
灵敏度高:Gel Red的检测灵敏度比EB高8~10倍,在检测低浓度、微量DNA或RNA方面比EB更佳,尤其对小分子量的DNA检测非常灵敏。
稳定性好:Gel Red的稳定性很好,可以室温长时间保存及使用微波炉加热。同时,它的光稳定性良好,可以在室内正常光线下操作而无需避光。由于其热稳定性和光稳定性,含Gel Red的凝胶在核酸染色时的重复性非常好。
三、使用方法
Gel Red的使用方法和EB一致,可以根据使用者的偏好或实验目的采用以下方法中的一种:
琼脂糖凝胶中添加Gel Red:根据需要配制适当浓度(例如1~3%)的琼脂糖胶液。在琼脂糖完-全融解后,适当冷却但又不会使琼脂糖凝固时,按照每100毫升胶液加入10微升Gel Red的比例(10000:1)加入Gel Red。混匀后即可把琼脂糖胶液倒入制备凝胶的模具中。适量的DNA或RNA在该胶中电泳后,在紫外灯下可以观察到明亮的核酸条带。由于Gel Red非常稳定,所以也可以在琼脂糖融解前加入Gel Red,然后再微波炉加热融解并混匀。
电泳完毕后对琼脂糖凝胶染色:按照每100毫升100mM NaCl溶液或水中加入2040微升Gel Red的比例(25005000:1)加入Gel Red,配制成Gel Red染色液。把电泳完毕的琼脂糖凝胶放到适当的容器中,加入适量上述配制好的Gel Red染色液,确保至少盖住凝胶。在摇床上缓慢摇动(约3050rpm)染色2030分钟。染色时间根据胶的厚度而定,胶厚则染色时间需要长一些,胶薄则染色时间可以短一些。染色完毕后,在紫外灯下即可观察核酸条带。要观察到更为清晰的条带,可以在染色后用水漂洗12次,每次35分钟,以消除背景。
Gel Red(10000×)
仅供科研实验用,不做其他用途!
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