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大鼠蛋白激酶Cα(PKCα)检测试剂盒的对照说明

1.封闭时间改用37度2h，是4度24h

2.洗板改成5次以上

以上为了保证减少非特异性吸附造成的显色，影响对结果的判断和分析。

结果显示：1：10、1：100、1：200、1：400的阴、阳血清均随抗原呈现剃度变化。

阳性血清呈梯度变化是可以理解的，但阴性血清不该这么明显，原因有二：a.包被抗原量不足，大鼠蛋白激酶Cα(PKCα)检测试剂盒封闭不够充分，导致板条仍有未封闭的位点，可以和酶标抗体结合，自然包被抗原量越多，位点越少，则显色越弱。b.阴性血清稀释度过低，导致仍存在非特异的结合，在封闭*的情况下，要保证阴性血清OD值低，根据具体情况可以稀释到1000倍或以上都可以。

抗原空白对照背景低，但一抗空白对照背景高，甚至比阴性血清OD值高。

这点用封闭不*比较好解释，阴性血清在这里相当于起了一个封闭作用，酶标抗体结合少了，显色自然低了。

大鼠蛋白激酶Cα(PKCα)检测试剂盒另外1：10稀释的阴性血清和阳性血清OD值相差较大，这与报道较多的1：100稀释效果好有些出入，不知是否可以用于以后检测时的稀释倍数？？以上原因是否与包被抗原未进行较高提纯以及封闭有关？

OD值相差较大，但首先要看阴性对照的本底如何（较空白空如何）？如果本底高，是会对结果造成影响的。这里需要找出稀释度。

大鼠蛋白激酶Cα(PKCα)检测试剂盒抗原的提纯是取决于抗体特异性的，如果所使用的为单抗，对抗原纯度要求可以不高，但是如果是多抗，那么抗原不纯将容易引起非特异性的显色。

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