生物素衍生物的标记及其产物的检测原理

生物素衍生物的标记及其产物的检测原理

一、生物素简介

生物素（biotin，B）分子量244．31D．生物素分子有两个环状结构，其中Ⅰ环为咪唑酮环，是与亲和素结合的主要部位；Ⅱ环为噻吩环，C2上有一戊酸侧链，其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的*结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素。

二、生物素衍生物简介

1、常见的标记方法

★对抗原、抗体标记后活性不变；可对标记材料（如酶）标记，但碱性磷酸酶标记后活性将降低。

2、常见的生物素衍生物结构及其性质

三、生物素标记产物的检测

1、检测原理：

亲和素（avidin，AV）亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白，分子量为68kD，等电点pI=10.5；耐热井耐受多种蛋白水解酶的作用．尤其是与生物素结合后，稳定性更好。每个亲和素能结合4个分子的生物素，二者之间的亲和力*，亲和素常数（K）为10^15 l/mol，比抗原与抗体间的亲和力（K＝10^5～10^11 L/mol）至少高1万倍，二者的结合特异性高和稳定性好。因此，可以用标记HRP或荧光素的亲和素或链霉亲和素去检测生物素的标记产物。

2、检测方法举例：

1）荧光标记的亲和素进行荧光检测

2）标记亲和素-生物素ELISA检测法（LBA法）

3）桥接亲和素-生物素ELISA检测法（BAB法）

4）亲和素-生物素-过氧化物酶复合物ELISA检测法（ABC法）

5）标记链霉亲和素-生物素ELISA检测法（LSAB法）