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细胞逆转录酶(REVERSE TRANSCRIPTASE)活性荧光定量

2021-3-10  阅读(1742)

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MB50353.1 v.A

 

  细胞逆转录酶(REVERSE TRANSCRIPTASE)活性荧光定量检测试剂盒

产品说明书(中文版)

 

主要用途

 

  细胞逆转录酶(REVERSE TRANSCRIPTASE活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过双链分子底物,在dTTP的参与下,通过逆转录酶的催化,聚合产生RNA-DNA异源双链DNA分子,由PicoGreen特异染色即采用荧光法来测定细胞裂解样品中酶活性*而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的其适用于各种细胞裂解悬液样品(动物、人体、昆虫等)逆转录酶的活性,以及抑制剂检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。

 

技术背景

 

逆转录酶(REVERSE TRANSCRIPTASEEC2.7.7.49),又称为RNA依赖性DNA聚合酶(RNA-dependent DNA polymerase),是将单链RNA分子转录为双链DNADNA聚合酶,包括HIV逆转录酶、莫洛尼氏鼠白血病病毒(Moloney murine leukemia virusMMLV)逆转录酶、禽类成髓细胞瘤病毒(avian myeloblastosis virusAMV)逆转录酶、端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase) 等。逆转录病毒使用逆转录酶达到逆转录RNADNA,然后整合到宿主基因组再复制。在真核生物中,端粒酶是一种逆转录酶。逆转录酶在分子生物学中得到广泛运用。检测逆转录酶活性成为病毒感染的监测手段,同时作为药物筛选的靶标。基于poly-A模板与oligo-dT引物构成的双链分子底物,在dTTP的参与下,通过逆转录酶的催化,聚合产生RNA-DNA异源双链DNA分子(heteroduplexes),由PicoGreen特异染色,根据荧光强度分析(激发波长480nm,散发波长520nm),来定量测定逆转录酶的活性。 

 

产品内容

 

  清理液(Reagent A 毫升

  裂解液(Reagent B 毫升

  缓冲液(Reagent C 毫升

  底物液(Reagent D 微升

  终止液(Reagent E 微升

  染色液(Reagent F 微升

  稀释液(Reagent G 毫升

  标准液(Reagent H 微升

产品说明书    1

 

保存方式

 

保存  清理液(Reagent A4冰箱里其余的保存在-20冰箱里;  染色液(Reagent F避免光照;有效保证6

 

 

 

用户自备

 

1.5毫升离心管:用于样品保存的容器

15毫升锥形离心管:用于样品制备的容器

细胞刮脱棒:用于细胞脱离

DOUNCE匀浆器:用于裂解组织

台式离心机:用于样品操作

比色皿或酶标板:用于荧光分析的容器

荧光分光光度仪或荧光酶标仪:用于荧光分析

 

实验步骤

 

实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的  裂解液(Reagent B置入冰槽里融化。然后进行下列操作。

 

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