原代培养心肌细胞作为一种主要的体外研究模型，被广泛应用于心血管研究之中。常用于电生理、心肌损伤修复、心肌缺血再灌注损伤机制和药物保护心肌的机制研究。我们经过长期尝试，摸索出了一些行之有效的方法，能够获得纯度高、活性好的原代新生大鼠、小鼠心肌细胞。

• 分离方法：
  新生大鼠或小鼠心肌细胞常用II型胶原酶消化法。例如，通过剪碎心脏组织后，用0.05% II型胶原酶预消化去除血细胞，再用0.1% II型胶原酶分阶段消化（12分钟+4分钟），结合差速离心或Percoll密度梯度离心分离心肌细胞，存活率可达80%以上。成年心肌细胞则需优化酶解条件，如添加布雷他汀（Blebbistatin）以抑制收缩损伤，提高活力和电生理特性。

• 关键优化：

• 鼠龄选择：新生1-3日龄乳鼠心肌细胞增殖能力较强，分离后贴壁快、存活率高；成年心肌细胞需更精细的酶解流程。

• 培养基与基质：MEM培养基结合层粘连蛋白基质可维持心肌细胞形态和功能。

• 冻存技术：优化冷冻保存液（如含DMSO和血清）可实现66%以上的细胞回收率，且功能损伤极小。