平板克隆形实验步骤

1、细胞悬液制备:取对数生长期的单层培养细胞，用0. 25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，离后用*培养基重悬,制成细胞悬液。

2、细胞种板:将细胞悬液作梯度倍数稀释，以每皿50、100、 200、 500、1000、 2000个细胞的梯度密度分别接种含1 ml 37 C预热培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37 C 5% Co2的环境下，静置培养。

3、细胞观察:显微镜下观察到单个细胞长到20个以上细胞克隆，培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去.上清液，用PBS小心浸洗2次。加纯甲醇1ml,固定15分钟。然后去固定液,加适量Giemsa应用染色液染10分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥，手记拍照采集图像。

4、克隆计数:用肉眼直接计数克隆数，后计算克隆形成率。

结果分析

平板克隆克隆形成率=克隆数接种细胞数x100%