免疫荧光染色实验
免疫荧光是标记免疫技术发展早的一种，它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，通过将抗体与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。

1、细胞固定和通透

为达到佳的检测效果，细胞需要经过固定和通透。这些步骤非常关键，细胞和抗原需要佳的结构，并利于抗体与抗原结合。通常情况下，需要通过以下步骤得以实现：细胞用2%-4%多聚甲醛固定，之后用0.1%皂角苷或0.02%的Triton X-100进行通透。前者是比较温柔的处理，但是对于核内抗原可能无效，需要用到Triton。使用皂角苷进行通透时，要注意它会引起细胞膜的可逆性通透，也就是除了在通透初期，在每个抗体孵育环节都需要进行通透。另外，细胞可以用冰甲醇进行同时固定和通透，可以避免去垢剂的使用。

2、抗体特异性

免疫荧光需要用到特异性非常强的抗体，可以避免高背景和不理想的蛋白定位结果。在大多数情况下，纯化抗体的效果很好，但是正确的对照可以帮助定位抗原。使用只有二抗染色的片子作为阴性对照，有利于减少降低背景干扰。

3、合适的抗体稀释比例

通过优化抗体稀释比例来优化染色，通常情况下1ug/ml的纯化抗体或者1:100-1:1000的抗血清足够达到特异性染色的结果。但在能低背景染色的前提下，可以通过增加浓度来提高信号强度。如果是*次使用该抗体或测定某抗原，强烈建议浓度梯度实验。

4、优化缓冲液和封闭剂

尽管很多抗原在常见的Buffer如PBS中可以很好的被染色，但是对于某些目的抗原，更换一下含有不同离子的缓冲液，比如钙、镁、钾等，可以带来很大程度上的改善。Rockland可提供优化过的IHC用封闭缓冲液，同样适用于荧光染色实验。

5、选择正确的二抗

如果您需要做免疫实验，我们强烈建议您选择进行过预吸附的二抗进行单染实验；如果是双重甚至是多重染色，那么使用预吸附的二抗。同时，请优先选择来自同一物种的二抗

免疫荧光染色实验客户提供

细胞株或细胞爬片。注：细胞爬片不宜太密；细胞固定。组织切片，一抗

公司提供

基本实验步骤、药品、样品处理、图片及图片分析，荧光显微镜或共聚焦显微镜拍摄

实验周期：1-3周