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上海申知心生物科技有限公司
主营产品： 高血脂症动物模型,心血管疾病动物模型,缺血性心脏病动物模型 |
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| 参考价 | 面议 |
更新时间：2025-04-29 09:44:53浏览次数：1726
联系我们时请说明是化工仪器网上看到的信息，谢谢!
取材与预处理
组织获取：需无菌操作快速获取新鲜组织（如肝脏、心肌等），避免机械损伤和干燥。例如，肝细胞分离需麻醉大鼠并进行肝脏灌流；骨髓细胞需剪开小鼠下肢并冲洗骨髓
组织处理：剪碎组织至1-3 mm³小块，便于后续消化。
细胞分散
酶消化法（常用）：使用胰蛋白酶、胶原酶等消化细胞外基质，释放单个细胞。不同组织需调整酶浓度和作用时间（如小鼠肾脏需严格控制消化时间）。
机械法：通过剪切、研磨或挤压分散组织，适用于坚硬组织（如心肌）或纤维少的组织（如脑组织）。
悬浮离心法：低速离心分离血液或腹水中的细胞，利用密度差异分层收集。
纯化与培养
梯度离心/差异贴壁：去除杂质细胞（如红细胞）或利用贴壁速度差异纯化目标细胞（如心肌细胞）。
培养条件：使用含生长因子（如EGF、bFGF）的培养基，并根据细胞类型调整血清浓度（如软骨细胞需低浓度胎牛血清）。
| 方法 | 操作要点 | 适用组织 | 优缺点 | 来源 |
|---|---|---|---|---|
| 酶消化法 | 胰蛋白酶/胶原酶消化，控制时间和浓度 | 实体组织（皮肤、肿瘤等） | 高效但需优化条件，避免过度损伤细胞 | |
| 机械分散法 | 剪切、研磨或挤压（如注射器针头压出细胞） | 坚硬组织（骨骼肌）或脑组织 | 快速但细胞损伤大，纯度较低 | |
| 悬浮离心法 | 低速离心（1000 rpm，10分钟） | 血液、羊水等悬液 | 操作简便，但仅适用于悬浮细胞 | |
| 试剂盒法 | 正向选择（抗体捕获）或负向选择（去除杂质） | 复杂组织（如PBMC中分离T细胞） | 高纯度但成本较高 |
无菌操作：全程在超净台中进行，避免污染。
酶活性控制：预实验确定最佳酶浓度和作用时间，消化后需用含血清培养基终止反应。
细胞活力检测：使用台盼蓝染色法评估细胞存活率（如原代肝细胞需活力＞85%）
。
标准化培养：不同实验室条件差异可能影响结果，需统一培养基和传代流程。
快速消化法（RD法） ：将软骨细胞分离时间从12-16小时缩短至3小时，提高存活率和增殖活性。
改良培养基：添加维生素C或PLGA纳米颗粒，减少血清依赖并维持细胞功能。
3D培养技术：结合酶消化法分离细胞后，模拟体内环境进行三维培养，提升研究真实性。
