DMEM 培养基

DMEM 培养基

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（4500mg/L）和低糖型(1000mg/L)。

DMEM是 dulbecco's modified eagle medium的缩写，所以其特点主要包括以下：

（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如；

（2）维生素含量为依格尔培养基的4倍；

（3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸；

（4）含有微量的铁离子。

注意事项：

（1）无菌操作：细菌或霉菌污染是培养失败的常见原因，必须加强各个环节的无菌操作观念，以预防为主，一旦污染，一般很难消除。

（2）培养液：所用的培养液必须满足细胞生存和生长的必要条件。由于细胞来源的动物种类、组织类型不同，对培养液的要求有一定的差异，必要时可用预实验的方法选择适当的培养液。

（3）胎牛血清：胎牛血清对于维持培养细胞的生存和促进细胞增殖起着关键性作用。可选择多种不同批号的胎牛血清进行小样分析。一旦确定某一厂家的某一批号胎牛血清后，就保持应用至实验完成。想了解血清的秘密，可以参考Nothing：关于血清，你不知道的太多了

（4）：必须新鲜配制，贮存时间过长(即使是-20℃低温保存)，也将影响消化效力，导致消化时间过长，细胞损伤增加。

（5）L-几乎所有细胞对有较高的要求，细胞需要核酸和蛋白质，在缺时，细胞会因生长不良而死亡。液中很不稳定，加有养液在4℃冰箱贮存两周以上时，就应重新加入原来量的

（6）静置培养：原代细胞在消化分离后，置于CO2培养箱的头24～48h (必要时72h)内，应处于绝对静置状态，切忌不时地取出培养瓶观察生长状况，这将使原代分离细胞难以贴壁，更谈不上伸展和增殖，初学者尤应注意。不必担心培养液中的营养成分会消耗光，在细胞增殖之前对营养的要求并不大。原代培养初期仅加一薄层培养液的目的也在于有利于细胞贴壁伸展。

（7）消化时间：一般消化至肉眼尚可见微小组织颗粒即可，因为此时组织颗粒已经松散，略经吹打即成细胞团或单个细胞，过久的消化往往导致细胞损伤加重，细胞培养成活率降低。

（8）其他生长因子：经过以上处理，一般原代分离细胞培养均可以成功。对于少数特殊类型细胞也可以考虑加一些特殊的生长因子，如胰岛素能促使细胞摄取葡萄糖和氨基酸。另外，内毒素、EGF、FGF等均有促有丝分裂作用，但费用较高。

细胞培养最初认识：

什么是细胞培养？ 细胞培养是指将细胞从动物或植物体内取出，然后在适宜的人工环境中生长的过程。细胞可以在培养前直接从组织中取出并通过酶或机械方法进行解离，也可以来源于已建立的细胞系或细胞株。

原代培养：

原代培养是指细胞从组织中分离出来后，在适宜条件下增殖，直到它们占据所有可用的基质（即达到汇合状态）的培养阶段。在此阶段，必须通过将细胞转移到含有新鲜生长培养基的新容器中进行继代培养（即传代），以为其提供更多的继续生长空间。

细胞系：

第一次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系。来自于原代培养的细胞系寿命有限（即：有限细胞系），随着细胞的传代，生长能力的细胞会占据优势，最终导致细胞群体在基因型和表型上达到一定程度的均一性。

细胞株：

如果通过克隆或其他方法从培养物中阳性筛选出了细胞系的亚群，则该细胞系成为一个细胞株。与亲代细胞系起始时相比，细胞株通常会获得一些其他的遗传学改变。

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