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| 供货周期 | 现货 | 规格 | 100管/96样 |
|---|---|---|---|
| 货号 | EY-01S146 | 应用领域 | 生物产业 |
| 主要用途 | 仅用于科研 |
产品简介
详细介绍
商品属性：
产品名称：超氧化物歧化酶（SOD）生化检测试剂盒(WST8法)
规格：100管/96样
货号 : EY-01S146
测试方法:微量法
分类：氧化与抗氧化系列
商品详情：
测定意义：
SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成H2O2和O2。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H2O2主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。
测定原理：
通过及氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-)，O2-可与WST-8反应产生水溶性染料甲臜，后者在450nm处有吸收；SOD可清除O2-，从而抑制了甲臜的形成；反应液黄色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、离心机、移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；16000g， 4℃离心20min，取上清液置冰上待测。
3、血清等液体：直接测定。
ADH测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三在25℃水浴中保温30 min。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL样本上清液、800μL试剂三和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。△A测定管=A1-A2。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、将试剂二在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。
3、操作表：
试剂名称（μL） | 测定孔 |
样本 | 20 |
试剂二 | 760 |
试剂三 | 10 |
试剂四 | 10 |
将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中，混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和反应1min后的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。
注意：若A1-A2大于0.5，需将样本用提取液稀释，使A1-A2小于0.5，可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
NAD-MDH活力单位的计算：
1、血清（浆）NAD-MDH活力的计算
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=6430×ΔA
2、组织、细菌或细胞中NAD-MDH活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
超氧化物歧化酶（SOD）生化检测试剂盒(WST8法)（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W× V样÷V样总）÷T =6430×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（2000×V样÷V样总）÷T=3.215×ΔA
V反总：反应体系总体积，8×10-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；2000：细胞或细菌总数，2000万。
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