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| 供货周期 | 现货 | 规格 | 100管/96样 50管/48样 |
|---|---|---|---|
| 货号 | EY-01S1229 | 应用领域 | 生物产业 |
| 主要用途 | 仅用于科研 |
产品简介
详细介绍
商品属性：
产品名称：海藻糖6磷酸合成酶(TPS)生化检测试剂盒
规格：100管/96样 50管/48样
货号 : EY-01S1229
测试方法:微量法 紫外分光光度法
分类：蔗糖系列
商品详情：
测定意义：
海藻糖是由两个糖分子以α，α-1-1 糖苷键连接而成的一种非还原双糖，广泛存在于细菌、酵母菌、霉菌、食用菌、低等植物、昆虫、无脊椎动物和高等植物等多种有机体中。海藻糖的非还原性决定了它对酸、碱、高温等的稳定性。另外，它本身具有很强的吸水性，使它在生物体内具有抗脱水作用，在逆境条件下可通过识别外界刺激、产生和传递信号、基因表达和代谢调节来保护植物免受不良环境的伤害。
植物体内主要以糖为底物合成海藻糖，该反应首先在海藻糖-6-磷酸合成酶（trehalose-6-phosphate synthase，TPS）的作用下，催化尿苷二磷酸糖（UDPG）和 6-磷酸糖反应生成中间产物6-磷酸海藻糖，再在海藻糖-6-磷酸磷酸酶 （trehalose6-phosphate phosphatase，TPP）的作用下去磷酸化，生成海藻糖。因此，测定TPS活性对于研究植物逆境具有重要意义。
测定原理：
TPS 催化 UDPG 与 G6P 生成海藻糖-6-磷酸，同时产生 UDP；UDP 在丙酮酸激酶与乳酸脱氢酶作用下，氧化 NADH 为 NAD+，NADH 的下降速率与 UDP 含量成正比，通过 340nm 吸光度下降速率反映 TPS 活性。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；16000g， 4℃离心20min，取上清液置冰上待测。
3、血清等液体：直接测定。
ADH测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三在25℃水浴中保温30 min。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL样本上清液、800μL试剂三和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。△A测定管=A1-A2。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、将试剂二在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。
3、操作表：
试剂名称（μL） | 测定孔 |
样本 | 20 |
试剂二 | 760 |
试剂三 | 10 |
试剂四 | 10 |
将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中，混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和反应1min后的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。
注意：若A1-A2大于0.5，需将样本用提取液稀释，使A1-A2小于0.5，可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。
NAD-MDH活力单位的计算：
1、血清（浆）NAD-MDH活力的计算
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=6430×ΔA
2、组织、细菌或细胞中NAD-MDH活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W× V样÷V样总）÷T =6430×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（2000×V样÷V样总）÷T=3.215×ΔA
V反总：反应体系总体积，8×10-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；2000：细胞或细菌总数，2000万。
公司正在销售的产品：
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活力荧光染色试剂盒 | 动物组织超氧化物歧化酶（SOD）亚型制备试剂盒 | 胆盐乳糖瓶装颗粒培养基 规格： 250g 用途： 用于药品中大肠杆菌和绿脓杆菌的增菌培养 |
荧光或共聚焦显微镜制片封片处理液（荧光稳定、保存） | 人体p16基因甲基化检测试剂盒 | Schaedler琼脂 250(g) incubation media Schaedler琼脂 250(g) |
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线粒体呼吸链复合物IV（正铁－氧化还原酶） | MC培养基 250g 用于食品中乳酸菌总数测定 | 气单胞菌培养基添加剂 Ampicillin Selective Supplement 10支 每支添加剂加入100ml气单胞菌培养基基础 |
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动物细胞醛酮还原酶1B（aldo-keto reductase 1B）活性比色法定量检测试剂盒 | 酚红糖肉汤/Phenol Red Dextrose Broth 蜡样芽孢杆菌糖分解试验 250克 国产/进口 | 浅灰链霉菌 支/瓶 |
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