BINKIT® NK细胞扩增试剂盒

BINKIT^® NK细胞扩增套装（外周血单核细胞来源）

◆原理

　　BINKIT^® 可从外周血单核细胞扩增高活性的自然杀伤（NK）细胞。

◆优点・特色

●无需饲养层细胞，即可从外周血细胞 (PBMCs)中扩增NK细胞

●3周时间内NK细胞的数目可扩增几百到几千倍

●NK细胞将获得增强的细胞杀伤性

●该试剂盒适合20~50 mL的外周血细胞

●Xeno-free（不含动物来源的材料）

◆案例・应用

<试剂盒组成>

●NK 细胞初始培养基

●NK细胞初始培养瓶

●NK细胞传代培养基

●BINKIT^® 明细表(PDF格式)

<未提供材料>

●Ficoll 淋巴细胞分层液（GE Healthcare）

●无菌PBS

●FBS或自体血浆（56℃加热30分钟以灭活）

<结果>

图 1 使用BINKIT^® 进行体外NK细胞扩增

利用BINKIT^® 对外周血单核细胞进行NK细胞扩增，CD3-CD56+细胞从15.8％增加到88.6％。

图 2 使用BINKIT^® 进行体外NK细胞扩增

利用BINKIT^® 对外周血单核细胞（来自健康自愿者，HD, n=3）进行NK细胞扩增。

细胞计数（左）和倍率的变化（右）表明NK细胞体在外高效扩增。

图3  使用BINKIT^® 进行体外NK细胞扩增

分别以BINKIT扩增的NK细胞（实线）和从3名志愿者新鲜分离的NK细胞（虚线）来检测NK细胞对K562细胞的杀伤性。

结果表明，扩增后的NK细胞对K562细胞杀伤性显著增强（P<0.01）。

<培养步骤>

(1) 准备试剂

在NK细胞初始培养基和NK细胞传代培养基中，加入5% (v/v) 的热灭活FBS或自体血浆。

(2) 制备外周血单核细胞（PBMCs）

通过Ficoll密度梯度离心，从人全血中分离外周血单核细胞。

(3)清洗NK细胞初始培养瓶

加入10 mLPBS至NK细胞初始培养瓶。倾斜培养瓶使PBS覆盖整个表面。

将培养瓶中液体全部倒出，小心以免刮伤培养瓶的表面。重复洗涤过程两次。

(4)从PBMCs中培养NK细胞

将1×10⁶ cells/mL 的PBMCs 悬浮于NK细胞初始培养基中。每1 mL 细胞悬浮液加入40 μL的NK细胞初始混合物。

细胞悬液转移至预洗涤的NK细胞初始培养瓶，在37℃，5％的CO₂培养3天。

(5)更换培养基及传代

同贴壁细胞处理一样，转移时置于锥形离心管，200×g离心8分钟。

去除上清，将1×10⁶ cells/mL 的NK细胞悬浮于传代培养基中，培养基内加入5 mL

转移后的悬浮细胞置于常规培养瓶中，在37℃，5％ CO₂条件下培养。

每2-3天将 0.8×10⁶ cells/mL 细胞置于*NK细胞传代培养基中，进行传代培养。

<建议培养期>

2-3 周

注意：试剂仅供科研使用，不可用于临床。 

BINKIT^® NK细胞扩增套装（外周血单核细胞来源）