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犬细小病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

Canine Parvo Virus(CPV)

产品及特点

犬犬细小病毒(Canine Parvovirus，CPV)在分类上属细小病毒属细小病毒科，是一 种单链 DNA 病毒。CPV 是感染犬、猫、狼、狐等动物并引起细小病毒病，感染率高达 100%，致死率 10-50%。PCR 是目前检测 CPV 的方法，本产品就是定性 PCR 产品（产品编号 11-150）基础上升级的定量 PCR 检测试剂盒，专门用于定量鉴定检 测 CPV。本试剂盒具有下列特点：

1. 根据 CPV 衣壳蛋白基因 VP2 设计的针对 CPV 的 PCR 引物，专一性强。

2. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。

3. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。

4. 本试剂盒足够 100 次 20uL 反应体系的荧光定量 PCR。

5. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 

犬细小病毒染料法荧光定量PCR试剂盒规格及成分

运输及保存 低温运输、-20℃保存(A 袋和 B 袋的试剂放样品准备区、C 袋的阳性对照跟 A 袋 和 B 袋的成分分开放置)，有效期一年。 

自备试剂  DNA 模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。

使用方法 一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容，也可以选购本公司的柱式病毒 DNAout。

二、引物的制备（在样品制备室进行）

2. 按引物标签提示在装引物干粉的管中直接加入适量的超纯水（加入量见引物试管上 的标签），使得两条引物的浓度均为 10 μM（10pmol/μL），然后各取 110 μL 混合在一起，标注为引物混合物，放冰上待用。此引物混合物足够 100 次 PCR。

三、稀释阳性对照（以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于阳性对照浓度非常 高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他 成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照， 只提供可以直接使用的长为 180bp 的 DNA 段作为阳性对照。

3. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

4. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。

5. 在 7 号管中加入 5 μL 本试剂盒提供的 10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得 10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分 震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

7. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5 拷贝/ μL 的阳性对照。放冰上待用。

8. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，得 10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放 冰上待用。重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

三、设置 PCR 反应（20 μL 体系，在样品制备室进行）

9. 在 PCR 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次。样品管 和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子 储存好后后加）： 

10. 盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR（可以根据仪器不同而自行优化）。

11. 数据采集 在每个循环的第二步进行荧光信号的采集，具体操作按所用仪器推荐的流程进行。 本产品中所含的荧光染料在不结合 DNA 时，大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的大吸收光谱在 500 nm，大发射光谱在 530 nm。

四、数据处理

12. 以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品 浓度的 log 和标准曲线计算出样品 DNA 的浓度。