小鼠防御素β1（DEFβ1）ELISA试剂盒

使用小鼠防御素β1(DEFβ1)ELISA试剂盒检测过程中值得关注的问题

浓缩：由于净化过程中引入的溶剂，可能会降低待测组分的浓度或者不适宜直接分析，需要去除全部有机溶剂。即试剂盒前处理步骤中把样本在60℃氮气下吹干，再用复溶液溶解干燥残留物。

浓缩方式：氮气吹干除杂、压缩空气吹干除杂。

注意：1在吹干样本之前，用甲醇清洗针头，防止杂质干扰。2在吹样本时，针头应在液面上空，避免与样本接触，防止产生交叉污染。3样本吹干后应立即取下，避免吹的时间过长，影响zui终检测结果。4不同的药物，吹干后样本的保质期不同，提倡待样本回到室温后立即复溶。5 净化：经过提取的待测组分中通常含有一些会干扰试剂盒中抗原抗体反应的杂质或者是含有与待测物结构相似的杂质。将待测组分与杂质分离的过程，我们称为小鼠防御素β1(DEFβ1)ELISA试剂盒中样本的净化。在我们现有的试剂盒前处理方法中涉及到的zui常见的净化是：液液分配法。

比如：用复溶液溶解干燥残留物之前先加入适量的正己烷，在加入正己烷和复溶液涡动后如果出现乳化现象，可以60℃水浴加热，至乳化现象消失或减弱后，加大离心转速进行离心。

实例：

A、氟喹诺酮类药物试剂盒现有的水产样本前处理方法中，用二氯甲烷作为提取剂。

注意：

 (a)二氯甲烷的密度比水大，离心完后，二氯甲烷在下层，须先用加样器吸尽上层废液后，再按要求取适量的下层吹干。

 (b)在用加样器吸取下层的有机相时，正常操作往往取量不准确，此时用带有刻度，且刻度较准确的玻璃管来定量。

 (c)上诉情况对有经验的试验员还可以通过灵活控制加样器来控制取样的准确性。

 (d)在振荡过程中要注意安全。二氯甲烷在振荡的过程中，如果离心管密封性不是很好，往往容易爆开；在进行振荡时，不要让离心管口对准自己或者其他人，避免溅到自己或者他人身上。

 (e)小鼠防御素β1(DEFβ1)ELISA试剂盒在使用前充分回温很必要，如回温不充分该项目曲线受影响较明显。

B、硝基呋喃代谢物检测过程中常见问题

 硝基呋喃代谢物有四种：3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)和1-氨基-2-内酰脲(AHD)在检测过程中也需要同其它项目一样进行添加回收测评，其中需要注意以下几个问题。

  代谢物在组织中是与蛋白呈结合状态，采用普通的有机溶剂或缓冲液，是无法提取该代谢物的。需要用盐酸水解后才能使呋喃类代谢物游离，所以在加入去离子水、盐酸和2-硝基苯甲醛(2-NBA)混合均匀后，其pH应在1-3之间，否则不利用水解代谢物。

在衍生化过程中，温度和时间决定其衍生化产率，衍生化后在加入氢氧化钠和磷酸氢二钾时，其pH应在中性左右。由于部分样本的缓冲能力不同，所以需对其pH进行测定，因为在酸性或碱性环境中，不利于呋喃类代谢物的提取回收，同时也容易出现假阳性。

小鼠防御素β1(DEFβ1)ELISA试剂盒结果判断定性测定 

  定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答，分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标本在该测定系统中有反应。"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果，即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的zui高稀释度即为滴度。根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。

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