人磷酸化乙酰辅酶A(PaCoA)ELISA试剂盒基因工程抗原是抗原基因在质粒载体中原核或真核表达的蛋白质抗原,多以大肠杆菌或 酵母 菌为表达系统。该类抗原与合成肽相比具有以下特点:
a.分子量大。合成肽采用化学方法制备,由于工艺的局限,合成数量有限,只能达到数百个氨基酸;而利用基因工程制备的抗原,分子量更大。
b. 人磷酸化乙酰辅酶A(PaCoA)ELISA试剂盒稳定性好。包被的抗原的稳定性可使 试剂 盒的效期得到保证,早期以合成肽为包被抗原的 试剂 盒效期只有3-4 个月,采用基因工程抗原后效期大大延长了。
c.基因工程抗原将特异性抗原决定簇基因融合表达,表达产物包含更多的抗原决定簇,可提高 试剂 盒的灵敏度,提高检出率。
d. 纯化难度大。基因工程抗原的纯化技术难度较大。
人磷酸化乙酰辅酶A(PaCoA)ELISA试剂盒准备因子捕获微球
1) 计算试验管的数目:包括标准品、样品、设定和对照管
例:8个血清样本,7个标准稀释液,1个阴性对照,1个设定管,共17个管。考虑每次可能产生气泡等损失,因此,多算3个管,即20个
标准品管数+血清标本数+3=总管数
2) vortex每一个捕获微球悬液管数秒。
3) 混合微球悬液:
每个试验管加入25uL混合微球悬液,如20次试验管,则V=20×25μL=500μL,每种微球加V的1/20(也就是25μL)标记"mixed captured beads",RDB定容至V。
4) 3000g离心5min,小心吸走上清450μL,留50ul。
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