菌落总数检测板

1 菌落总数检测板原理及适用范围

菌落总数是指样品经过处理，在一定条件下培养后所得1 mL（g）检样或单位面积样品中所含菌落的总数，是zui常用的微生物检测项目。菌落总数检测板是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在检测板上呈红色，这样可缩短计数时间和增强计数效果。本产品适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定。执行标准：《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》（GB 4789.2）。

2 菌落总数检测板操作方法

2.1  样品处理：取样品 25 mL（g）放入含有225 mL灭菌磷酸缓冲稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质袋内，制成1:10的样品匀液，必要时用1 mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液调节样品匀液pH至6.6～7.2。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1 mL，注入含有9 mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，做出1:1000等稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。

2.2  接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。将菌落总数检测板置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1 mL样品匀液滴加到检测板内，迅速贴好上层膜并水平晃动检测板，让样品匀液均匀吸附在滤纸上，静置10s左右，待样品匀液*被吸附在滤纸上。每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。

2.3 培养：将检测板叠在一起，倒置于恒温培养箱内。一般食品培养温度为36℃±1℃，培养15～24 h；水产品培养温度为30℃±1℃，培养48 h。

3  结果判读

细菌在检测板上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（30～300 CFU）的检测板进行计数，乘以稀释倍数后即为每毫升（或每克）样品中所含的细菌菌落总数。

4  附加说明

4.1 菌落总数检测板检测结果与传统平板计数琼脂平板法符合率可达90％以上。

4.2 磷酸缓冲液稀释液的配制与灭菌：贮存液：称取34.0 g分析纯磷酸二氢钾（KH2PO4）溶于500 mL蒸馏水或纯净水中，用大约175 mL的1 mol/L氢氧化钠（NaOH）溶液调节PH至7.2，用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25 mL，用蒸馏水稀释至1000 mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。

4.3 生理盐水的配制与灭菌：取8.5 g分析纯氯化钠（NaCl）溶解到1000 mL蒸馏水或纯净水中，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15 min，或放入消毒碗柜中消毒。

4.4 注意使用过的检测板上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。