液态奶和奶粉中三聚氰胺的测定

依据 GB /T 22388-2008

1. 前处理

预处理：
液态奶：取原料乳5g，于50ml 离心管中，分别加入500ul，10ppm 的标准液（保证每kg 原料乳中各含1mg 标样）、15ml 0.1%三氯yi酸溶液和5ml 乙腈，涡旋1min， 超声20min，4500r/min 离心15min。取出上清液，用0.1%三氯yi酸定容至25ml 容量瓶中。振荡均匀，从中取5ml，再加入5ml 水作为上样液。

奶粉：取奶粉5g，于50ml 离心管中，分别加入500ul，10ppm 的标准液（保证每kg 奶粉中各含1mg 标样），15ml 0.1%三氯yi酸溶液和5ml 乙腈，涡旋1min，超声1h，放置冰箱中2h，4500r/min 离心15min。取出上清液，用0.1%三氯yi酸定容至25ml 容量瓶中。振荡均匀，从中取5ml，再加入5ml 水作为上样液。
Ps：由于奶粉不含水份，相对与液态奶，脂类与其他添加成分可能更多，因此增加超声时间及冷却步骤，以保证蛋白沉降*。

净化：
固相萃取小柱：
InertSep MPC 3ml/60mg 货号5010-27121 或WondaSep MPC 3ml/60mg 货号5010-MPC
活化：3ml 甲醇和5ml 水
上样：前处理后，备用的上样液
淋洗：3ml 水、3ml 甲醇
洗脱：6ml 5%氨水-甲醇
浓缩复溶：40 度氮气吹干，加入1ml 3Mmol/L 醋酸铵溶液：乙腈=20：80 的流动相，滤膜
过滤后，HPLC 分析。

2. 色谱分析

色谱柱：Inertsil HILIC 5um 4.6*250mm
流动相：A—2 mmol/L 醋酸铵溶液 B—乙腈
梯度表如下：

表1 梯度表

流速：1.0ml/min 柱温：40℃ 进样量：10ul 检测波长：240nm
仪器：Shimadzu LC-20A

3.基质加标回收率结果

三次平行实验结果（基质加标浓度均为1mg/kg）：
—液态奶

表2 液态奶加标回收率

—奶粉

表2 液态奶加标回收率

4. 结论

在此实验条件下，采用固相萃取小柱InertSep MPC 3ml/60mg或WondaSep MPC 3ml/60mg 分 析原料乳与奶粉中的三聚氰胺，回收率*要求。