血管内皮钙粘附蛋白试剂盒
血管内皮钙粘附蛋白试剂盒——依托复旦大学,集研发、销售、实验室技术服务的产品涉及分子生物学、细胞生物学、细菌学、遗传学、免疫学、生物化学、蛋白质学、细胞治疗、临床应用等领域。
类别简介:"专业经营进口胎牛血清、细胞因子、ELISA试剂盒、细胞、抗体、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗、其产品吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高, 代做ELISA实验等。"
供应商 :乾思生物
货期 :7-10天
1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
2. 加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的 “预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。
3. 孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4. 洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。
5. 试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7. 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。
◇ 液体类标本:标本必须为液体,不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积=100ul×检测种类。
◇ 血清:室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
◇ 血浆:应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入10%(v/v)抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
◇ 尿液、胸腹水、脑脊液:用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,应再次离心。
◇ 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
◇ 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清置于-20度或- 70度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
完整的ELISA试剂盒包含以下各组分: (1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂); (2)酶标记的抗原或抗体(结合物); (3)酶的底物; (4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中); (5)结合物及标本的稀释液; (6)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水; (7)酶反应终止液,常用的HRP反应终止液为硫酸,其浓度按加量及比色液终体积而异,在板式ELISA中一般采用3mol/L。主要包括37000多种一抗,1689种二抗,61种标签和标记物及42种试验小包装产品。
实验技术服务:荧光定量pcr服务、hplc(高效液相色谱法检测)服务、emsa(凝胶迁移或电泳迁移率实验)、酶联免疫(elisa)实验技术服务、免疫组化(ihc)技术服务、rna干扰(sirna,miran)、双向电泳、免疫共沉淀、科研整体实验外包服务、流式细胞检测服务、细胞培养技术服务、四甲基偶氮唑盐比色法(mtt方法、sci生物医学论文服务、荧光原位杂交fish服务、载体构建实验技术服务、抑制性消减杂交(ssh)技术服务、单核苷酸多态性分析(snp)检测服务、real-timepcr实验技术服务。
注:(1)各种试剂禁忌常年续加;
(2)同一品牌不同批号的试剂不能混用;
(3)续加试剂后要重新定标,标准液即开即用;
(4)不同厂家的试剂禁用同一标准液定标;
(5)质控必须用高、中、低值三个样本每天随患者标本测定;
(6) 抗凝剂的使用;
(7) 校准液的正确使用。如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。如果细胞已长满,即可进行传代培养。具体步骤如下:
1. 弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来。
3. 加入6-8ml*培养基,吸出,分到新的培养瓶中。一传二。传代后一半用我们的培养基,一半用你们的,以免细胞不适应而造成生长不好。
◇ 注意事项:收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定,对收集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融,标本2-8℃可保存48小时,-20℃可保存1个月,-70度可保存6个月,部分标本需添加抑肽酶。我公司是国内信誉双收的放心企业代理商,具有良好的市场信誉与口碑,我们有一对一的*的老师对客户进行技术指导,专业的销售和技术服务团队,欢迎广大师生、研究机构等,洽商。
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