样本采集:根据检测需求,采集合适的生物样本。例如,采集静脉血用于血清或血浆样本制备,采集尿液、唾液等其他生物液体样本时遵循相应的规范操作。确保样本采集过程规范,避免污染和样本量不足等问题。
试剂盒准备:从储存环境中取出试剂盒,平衡至室温(通常为 20℃ - 25℃),同时准备好移液器、吸头、酶标仪等实验器材,并检查其性能是否正常。
加样:将标准品、待测样本以及空白对照按规定体积准确加入微孔板相应孔中,轻轻振荡混匀,使样本与固相载体上的物质充分接触,然后在设定的温度和时间条件下孵育。
洗板:孵育结束后,弃去孔内液体,用洗涤液充分洗涤微孔板 3 - 5 次,以彻di清除未结合的物质,减少非特异性信号干扰。每次洗涤后需将微孔板拍干,防止残留液体影响后续反应。
加酶标物:向各孔加入适量酶标物,振荡混匀后再次孵育。
显色与终止:加入底物显色液,在避光条件下孵育,待颜色变化至合适程度时,加入终止液终止反应,使反应停止在最佳检测状态。
结果测定:立即使用酶标仪在规定波长下测定各孔 OD 值,根据标准曲线计算出样本中目标物的含量。
高灵敏度:能够检测到极低浓度的目标物,满足对微量样本或低表达水平生物标志物的检测需求。
特异性强:试剂盒中的抗体或抗原对目标物具有高度特异性,与其他类似物质交叉反应极小,保证检测结果的准确性。
重复性好:同一批样本多次检测结果稳定,变异系数小,为科研及临床诊断提供可靠且可重复的数据支持。
临床诊断:用于辅助诊断多种疾病,如感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等,通过检测相关生物标志物的含量,为医生提供诊断依据。
疾病监测:跟踪疾病的发展进程和治疗效果,例如监测肿瘤患者治疗过程中肿瘤标志物的变化,以评估治疗方案的有效性。
科研领域:在基础医学研究中,用于探究疾病的发病机制、药物研发过程中的药效评估等。