特异性强:经过精心筛选和优化的抗体,对目标物具有高度特异性,几乎不会与其他结构相似的物质发生交叉反应。有效避免了假阳性结果的出现,为检测结果的准确性提供了坚实保障。
重复性好:严格的生产工艺和完善的质量控制体系,确保了试剂盒批内和批间的良好重复性。多次重复检测同一批次样本,结果的变异系数(CV)被严格控制在极小范围,实验人员能够获取稳定可靠的数据,为科学研究的可重复性奠定基础。
操作简便:试剂盒配备了齐全的试剂和详细易懂的操作说明书,实验步骤简洁明了。即使是初次接触的实验人员,也能快速上手操作,无需复杂的仪器设备和高深的专业技能,极大地节省了实验时间和人力成本。
检测范围广:其检测范围覆盖了目标物在正常生理以及多种常见病理状态下的浓度区间。既能精准检测正常情况下的低水平表达,也能准确测定在疾病或实验干预后可能出现的高水平变化,适用于各类相关研究场景和临床诊断需求。
样本准备:依据实验目的收集合适的样本,如血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等。确保样本采集过程严格规范,避免样本污染、溶血、脂血等情况干扰检测结果。若样本采集后不能立即检测,需妥善保存于 -20℃或 -80℃冰箱,防止反复冻融。
试剂准备:从冰箱取出试剂盒,待其恢复至室温后,按照说明书依次准备好标准品、酶标二抗、底物、洗涤液等试剂。标准品需进行系列倍比稀释,用于绘制标准曲线。
加样:将稀释好的标准品和处理后的样本加入到预包被有特异性抗体的固相载体中,同时设置空白对照和阴性、阳性对照孔。轻轻振荡使液体充分混合均匀,然后将反应体系置于适宜温度(通常为 37℃)的恒温孵育箱中孵育一段时间,促使样本中的目标物与固相抗体充分结合。
洗涤:孵育结束后,倒掉反应体系中的液体,用洗涤液充分洗涤固相载体,一般需洗涤 5 次左右,以彻di清除未结合的物质,降低非特异性背景信号。每次洗涤后要确保固相载体充分沥干。
加酶标二抗:向固相载体中加入适量的酶标二抗,再次轻轻振荡混匀,放入恒温孵育箱中孵育,让酶标二抗与已结合的目标物充分结合。
再次洗涤:重复洗涤步骤,去除未结合的酶标二抗。
显色 / 检测信号:向固相载体中加入底物工作液,轻轻振荡混匀,将反应体系置于适宜条件下(如 37℃避光环境)孵育,此时酶标二抗上的酶会催化底物发生反应,产生可检测的信号。若为颜色反应,颜色会逐渐加深;若为荧光反应,则需使用荧光检测仪检测荧光强度。
终止反应(若有必要):当信号达到合适强度或显色达到预期效果时,加入终止液终止反应,使信号稳定下来。立即使用相应的检测仪器在特定波长下测定各孔的信号值,如使用酶标仪测定吸光度。
结果计算:根据标准品的信号值绘制标准曲线,依据样本的信号值从标准曲线上查出对应的目标物浓度,并结合样本的稀释倍数进行校正,最终得出样本中目标物的实际浓度。