高灵敏度:能够敏锐捕捉到极微量的 NCP,检测下限可达皮克级别。即便样本中 NCP 低表达,也能精准测定其含量,助力科研人员深入探究其在正常生理及病理状态下低水平表达时的功能。
特异性强:试剂盒内的抗体经过层层筛选与严格优化,对 NCP 具有ji高特异性,与其他结构相似的生物分子及干扰物质几乎不存在交叉反应。有效避免了假阳性结果的出现,极大地保障了检测结果的准确性与可靠性。
重复性佳:凭借严苛的生产工艺和完善的质量控制体系,该试剂盒批内和批间重复性表现卓yue。多次重复检测同一批次样本,结果的变异系数(CV)被严格控制在极小范围,实验人员能够获取稳定且可重复的数据,有力地支持了科学研究的可重复性。
操作便捷:试剂盒配备了齐全的试剂以及详尽的操作说明书,实验步骤清晰明了。即便新手实验人员,也能快速上手操作。整个检测流程无需复杂的仪器设备和高深的专业技能,显著节省了实验时间与人力成本。
检测范围宽:其检测范围覆盖了 NCP 在正常生理以及多种病理状态下常见的浓度区间。既能精准检测正常情况下低水平的 NCP 表达,也能准确测定在疾病或实验干预后可能出现的高水平 NCP 变化,适用于各类相关研究场景。
样本准备:根据实验目的收集血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等样本。确保样本采集过程规范,避免污染、溶血等情况干扰检测结果。若样本采集后需保存,应置于 - 20℃或 - 80℃冰箱,防止反复冻融。样本解冻时需在 4℃缓慢进行,避免温度过高影响 NCP 活性。
试剂准备:从冰箱取出试剂盒,使其恢复至室温。按照说明书依次准备好标准品、酶标抗体、底物、洗涤液等试剂。标准品需进行系列倍比稀释,用于绘制标准曲线。准备试剂时要保证操作环境清洁,使用干净的移液器及枪头,不同试剂的移液器分开使用,防止交叉污染。
加样:将稀释好的标准品和处理后的样本加入预包被有抗 NCP 抗体的微孔板中,同时设置空白对照孔。轻轻振荡使液体混合均匀,随后将微孔板放入 37℃恒温孵育箱孵育一段时间,促使样本中的 NCP 与包被抗体充分结合。加样时要保证移液器的准确性,加样体积精准,避免产生气泡影响检测结果。
洗涤:孵育结束后,倒掉孔内液体,用洗涤液充分洗涤微孔板 5 次,以彻di清除未结合的物质,降低非特异性背景信号。每次洗涤后要将微孔板拍干,确保洗涤效果。洗涤过程中要保证洗涤液充分覆盖孔壁,且每次洗涤的时间和力度一致。
加酶标抗体:向每孔加入适量酶标抗体,再次轻轻振荡混匀,放入 37℃恒温孵育箱孵育一段时间,让酶标抗体与已结合在包被抗体上的 NCP 结合。加酶标抗体时要避免试剂滴落在孔外。
再次洗涤:重复洗涤步骤,去除未结合的酶标抗体。操作要求与第一次洗涤一致,确保洗涤彻di。
显色:向每孔加入底物工作液,轻轻振荡混匀,将微孔板置于 37℃避光环境孵育,此时酶标抗体上的酶会催化底物显色,颜色会逐渐变深。显色过程要严格控制时间,避免显色过度或不足,且孵育环境需保持避光。
终止反应:当显色达到预期效果,加入终止液终止反应。溶液颜色随即固定,应立刻使用酶标仪在特定波长下测定各孔吸光度值。加入终止液后应迅速测量吸光度,以免溶液长时间放置导致颜色变化影响结果准确性。
结果计算:根据标准品的吸光度值绘制标准曲线,依据样本的吸光度值从标准曲线上查出对应的 NCP 浓度,并结合样本的稀释倍数进行校正,最终得出样本中 NCP 的实际浓度。计算过程要仔细核对数据,确保结果准确无误。