大鼠细胞间粘附分子1试剂盒
大鼠细胞间粘附分子1试剂盒主要有 ELISA 试剂盒和化学发光免疫分析试剂盒等类型,以下以 ELISA 试剂盒为例介绍:
检测原理
通常采用双抗体夹心法。将纯化的大鼠抗细胞间粘附分子 1 抗体包被于微孔板,制成固相抗体,加入含细胞间粘附分子 1 的样品,再与 HRP 标记的 ICAM-1 抗体结合,形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物,经洗涤后加底物 TMB 显色,TMB 在 HRP 酶催化下转化成蓝色,在酸作用下转化为黄色,颜色深浅和样品中的细胞间粘附分子 1 呈正相关,用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度,通过标准曲线计算样品中 ICAM-1 含量。
标本类型
血清、血浆、细胞上清液、脑脊液、腹腔液等。
操作步骤
以慧嘉生物的试剂盒为例:
进行标准品的稀释与加样,设置不同浓度梯度。
加样,分别设空白孔、待测样品孔,加样至酶标板孔底部并轻轻混匀。
用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。
小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。
每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
再次 37℃温育。
重复洗涤步骤。
每孔先加入显色剂 A 50μl,再加入显色剂 B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15 分钟。
每孔加终止液 50μl,终止反应。
以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度。
注意事项
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,一次加样时间控制在 5 分钟内。
标本中待测物质含量过高时,需先稀释后再测定,计算时乘以总稀释倍数。
封板膜只限一次性使用。
底物请避光保存,严格按说明书操作,试验结果以酶标仪读数为准。