半胱氨酸(Cys)含量检测试剂盒

一、半胱氨酸提取 ： 1、 液体样品中半胱氨酸提取：取 0.1mL 液体样品，加试剂一 0.9mL，充分混匀，11000 rpm 4℃离心 10min，取上清液，待测。 2、 组织中半胱氨酸提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，11000 rpm 4℃离心 10 min，取上清液待测。 3、 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10 4个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；11000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。二、测定操作： 1. 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 600 nm，蒸馏水调零。 2. 空白管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 100 μL 蒸馏水，500μL 试剂二，500μL 试剂三，混匀后室温静置 15 min，于 600nm 处测定吸光值，记为 A 空白管。 3. 标准管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 100 μL 标准液，500μL 试剂二，500μL 试剂三，混匀后室温静置 15 min，于 600nm 处测定吸光值，记为 A 标准管。 4. 测定管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 100 μL 上清液，500μL 试剂二，500μL 试剂三，混匀后室温静置 15 min，于 600nm 处测定吸光值，记为 A 测定管。

半胱氨酸含量计算： 1. 按液体样品的体积计算：半胱氨酸含量（μmol/mL）=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×（V 样总÷V 样）=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管) 2. 按样本质量计算：半胱氨酸含量（μmol/g）=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×（V 样总÷V 样）÷W=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管) ÷W 3. 按照蛋白浓度计算：半胱氨酸含量（μmol /mg prot）= [C 标准品×V 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]÷（V 样×Cpr）=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管) ÷Cpr 4. 按细胞数量计算：氨基酸含量（μmol /10 4 cell）=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)] ×（V 样总 ÷V 样×细胞数量）=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管) ÷细胞数量 C 标准品：标准品浓度，1μmol/mL；V 标准品：反应体系中加入标准品体积，0.1 mL；V 样：反应体系中加入样品提取液体积，0.1 mL；V 样总：加入提取液体积，1mL。W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL。

半胱氨酸(Cys)含量检测试剂盒

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。用前 1 天，向试剂三中加 5 mL 蒸馏水充分溶解，再加磷酸 1.25mL，混匀后盖紧（防止水分散失）沸水浴 2h；冷却后加 20 mL 蒸馏水，4℃可保存 2 周。标准品：液体×1 瓶，1μmol/mL 标准液，4℃保存。

相关文献：
《Sulfur dioxide derivatives alleviate cadmium toxicity by enhancing antioxidant defence and reducing Cd2+ uptake and translocation in foxtail millet seedlings》 作者:Yansha Han,Mengyang Wu,Lihong Hao,Huilan Yi 期刊:Ecotoxicology and Environmental Safety 影响因子:4.527 PMID:29625394