目录:北京索莱宝科技有限公司>>基因工程>>PCR>> D2810 DNA退火缓冲液
把要退火的DNA oligo用经灭菌的三蒸水配制成50μM。解冻Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)，混匀备用。如经常使用，本Buffer可放置2-8℃一个月。
2. 如下设置退火反应体系：
| Annealing Buffer for DNA Oligos(5X) | 20μl |
| DNA oligo A(50μM) | 20μl |
| DNA oligo B(50μM) | 20μl |
| Nuclease-Free Water | 40μl |
| 总体积 | 100μl |
按照上述顺序依次加入各种试剂，混匀。放入PCR仪。
3. 如下设置PCR仪进行退火反应：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 说明 |
| 1 | 95℃ | 2分钟 | 让oligo充分变性 |
| 2 | 每8秒下降0.1℃，降25℃(注1) | 约90分钟 | 退火 |
| 3 | 4℃ | 长时间保持 | 暂时存放 |
注1：如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能，也可以设置为每90秒下降1℃。
4. 退火结束后可以直接用于连接反应，也可以在-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应，好用纯化试剂盒进行纯化，或者确保退火产物在反应体系中体积不超过10%，以避免AnnealingBuffer对后续的酶反应体系的干扰。
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