柠檬酸(CA)含量检测试剂盒

产品名称:：  柠檬酸(CA)含量检测试剂盒

产品英文名: Citric Acid(CA) Content Assay Kit

产品货号：BC2150               产地：北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼

产品规格：50管/48样             产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：630
库存状态：现货                          
关键字:：      柠檬酸检测试剂盒|CA检测试剂盒|柠檬酸|试剂盒

简要介绍：
    CA是生物体内常见的有机酸，是重要的食品风味物质。此外，CA是三羧酸循环1步反应的产物。
    酸性条件下，柠檬酸还原Cr⁶⁺生成Cr³⁺，在545nm处有特征吸收峰；通过测定545nm吸光值的增加，即可计算出样品中柠檬酸含量。


产品详细描述
产品内容：
试剂一：液体90mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体0.1mL×1支，－20℃保存。
试剂四：粉剂×1瓶，室温保存。临用前配制，加入5mL试剂一，充分溶解。
试剂五：液体5mL×1瓶，4℃避光保存。
标准品：液体1mL×1支，1mmol/L柠檬酸标准液，4℃保存；临用前稀释成250μmol/L柠檬酸标准液。
产品说明：
    CA是生物体内常见的有机酸，是重要的食品风味物质。此外，CA是三羧酸循环第1步反应的产物。
    酸性条件下，柠檬酸还原Cr⁶⁺生成Cr³⁺，在545nm处有特征吸收峰；通过测定545nm吸光值的增加，即可计算出样品中柠檬酸含量。

试验所需自备仪器和样品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL比色皿和蒸馏水。
操作步骤：
一、样品中柠檬酸提取：

1. 液体样品中柠檬酸提取：取0.1mL液体加试剂一0.9mL，充分混匀，11000g/min 4℃离心10min，取上清液，待测。
2. 组织中柠檬酸提取：称约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，11000g/min 4℃离心10min，取上清液，待测。
3. 线粒体中柠檬酸提取：称约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，600g/min，4℃离心5min；取上清另一EP管中，11000g/min，4℃离心10min，弃上清（此上清液可用于细胞质CA含量测定）；向沉淀中加试剂二200μL，以及试剂三2μL，充分悬浮溶解，11000g/min，4℃离心10min，取上清液，待测。

二、测定：
1. 分光光度计预热30 min以上，调节波长到545 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂一置于30℃水浴中预热30min以上。
3. 按下表在1.5mLEP管中加入相应试剂
 

三、柠檬酸含量计算：

1. 按液体样品的体积计算：

柠檬酸含量（mmol/L）=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×样品稀释倍数×V总=2.5×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)
    C标准液：250μmol/L=0.25 m mol/L；样品稀释倍数：（0.1 mL样品+0.9mL试剂一）÷0.1 mL样品=10；V总：1 L。
2. 按组织鲜重计算：
柠檬酸含量（μ mol/g FW）=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷W
                        = 0.25×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管) ÷W
    C标准液：250 μ mol/L；V总：上清液总体积，1.0 mL=0.001 L；W：样品质量，g。

3. 按线粒体蛋白含量计算：

柠檬酸含量（μ mol/mg prot）=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]÷Cpr
                          =0.25×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管) ÷Cpr
    C标准液：250 μ mol/L=0.25μ mol/mL；Cpr：上清液蛋白质含量，mg/mL。
注意事项：
1. 样品处理等过程均需要在冰上进行。
2. 试剂五为易致癌物质，实验过程中，需佩戴手套，避免试剂五溅到皮肤上。
3. 柠檬酸提取液不能用于蛋白含量测定，如需测定蛋白含量，需另取组织，使用本公司BCA试剂盒进行测定。
4. 若反应30min后有明显的黑色小颗粒，属于正常现象，需将样本稀释后再测。

相关文献：
《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影响因子:5.959 PMID:30850587
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影响因子: PMID:30453281