样本采集:采集适量人静脉血,室温静置,待血液自然凝固后,经离心分离获取血清样本。采血过程需严格遵循无菌操作规范,避免样本受到污染。采集后的血清样本若不能及时检测,应妥善保存于 - 20℃冰箱,且要注意避免反复冻融,以防影响抗体活性。
试剂盒准备:从冰箱取出试剂盒,在室温(20℃ - 25℃)下平衡 30 分钟,确保试剂盒内各试剂温度均匀。同时准备好移液器、吸头、酶标仪等实验器材,并检查其性能是否正常,为检测工作做好充分准备。
加样:将标准品(如有)、待测血清样本以及空白对照按规定体积准确加入微孔板相应孔中,轻轻振荡混匀,使样本与包被抗原充分接触,随后在设定温度下孵育一定时间,促使抗原抗体反应充分进行。
洗板:孵育结束后,弃去孔内液体,用洗涤液充分洗涤微孔板 3 - 5 次,彻di清除未结合的物质,有效降低非特异性信号干扰。每次洗涤后需将微孔板拍干,防止残留液体影响后续反应结果。
加酶标抗体:向各孔加入适量酶标抗人 IgG 抗体,振荡混匀后再次孵育,使酶标抗体与已结合的军团菌 IgG 抗体充分结合。
显色与终止:加入底物显色液,在避光条件下孵育,待颜色变化至合适程度时,加入终止液终止反应,使反应停止在最佳检测状态,以便准确读取结果。
结果判定:立即使用酶标仪在规定波长下测定各孔 OD 值。若样本 OD 值大于试剂盒给定的临界值,则判定为阳性,表明样本中存在军团菌 IgG 抗体;若样本 OD 值小于等于临界值,则判定为阴性,即样本中未检测到军团菌 IgG 抗体。对于具有定量功能的试剂盒,可根据标准曲线计算出样本中军团菌 IgG 抗体的具体含量。
高灵敏度:能够检测到极低含量的军团菌 IgG 抗体,有助于发现早期感染或既往感染的潜在情况,为疾病诊断和病情评估提供有力支持。
特异性强:试剂盒中的抗原和酶标抗体对军团菌 IgG 抗体具有高度特异性,与其他病原体抗体交叉反应极小,保证检测结果的准确性,有效减少误诊和漏诊。
操作简便:整个检测流程相对标准化,操作步骤清晰明了,经过简单培训的人员即可熟练操作,适用于各级医疗机构和实验室。
结果稳定:在规定的保存条件下,试剂盒内各试剂性能稳定,多次检测同一批样本,结果重复性良好,为临床诊断和流行病学研究提供可靠的数据支撑。
军团菌感染诊断:辅助诊断军团菌感染,尤其是对于发病一段时间后的患者,IgG 抗体检测可作为重要的诊断依据,结合 IgM 抗体检测,有助于判断感染的阶段。
病情监测与预后评估:对于已确诊的军团菌感染患者,定期检测血清中军团菌 IgG 抗体水平,可了解病情发展趋势和治疗效果。若抗体水平逐渐下降,提示病情好转;若持续升高或维持在较高水平,可能意味着感染未得到有效控制或存在慢性感染情况。
流行病学调查:通过对特定人群血清中军团菌 IgG 抗体的检测,了解军团菌在人群中的感染率和流行情况,为制定公共卫生防控策略提供数据依据。