中文名称：HY STEMCEL MSC细胞无血清培养基 现货供应

英文名称：CCGmHuM® E8 Cocktail human MSCs Serum-Free Medium

货号：E8725F

规格：450+50mL/套

产品组份:

本产品包括以下8种明确公开组份:

DMEM/F12 base        Essential GFs

Glutamine             Transferrin

NaHCO3               Albumin

Selenium              Insulin

脂肪间充质干细胞的分离:

1. 人脂肪组织来自脂肪抽吸患者的废弃脂肪组织。

2. 无菌PBS反复漂洗除菌。

3. 将脂肪组织转移至50mL或250mL离心管,加入等体积的使用alpha-MEM配制的jiao原酶溶液,使其终浓度达到0.1%(重量/体积)。

4. 37℃,摇床(120rpm)消化2小时以上。

5. 室温静置10分钟,吸除上层油滴。

6. 离心,800g,10分钟,收集消化细胞。

7. PBS洗涤一次,500g,10分钟。MSCs无血清完 .全培养基悬浮细胞。

8. 计细胞数,调整细胞浓度,按照5~10×105/cm2底面积接种。

9. 次日观察,如无污染,继续培养至培养基颜色变黄,或贴壁细胞密度达到30%以上。补充新鲜的MSC无血清完.全培养基。

10. 细胞密度达到80%左右时,按照以下步骤传代培养。

间充质干细胞的传代:

1. 吸去培养液。

2. 用1×PBS洗涤细胞2次,以去除残留的培养液。

3. 加入PBS,之后加入0.25%Trypsin-0.1%EDTA,PBS与胰dan白酶体积比为4:1,两者总量以覆盖培养皿或培养瓶表面为宜。轻轻旋转,置37℃培养箱中消化3~5分钟。用手轻拍培养器皿的壁,显微镜下可见绝大部分细胞变圆,极少量细胞贴壁仍呈纺锤形,极少量细胞已经悬浮即可终止消化。依据不同批次胰dan白酶活性不同,消化的时间以显微镜下观察细胞变圆为准,但是,推荐消化时间不低于3分钟。

4. 立即加入等体积的间充质干细胞完.全培养液,用吸管吸取液体,反复吹打培养器皿底壁,使细胞 脱离瓶皿底壁。

5. 离心(250g,5分钟),吸去上清液。

6. 用2~3mL间充质干细胞的完.全培养液重悬细胞。

7. 按照6000个细胞/cm2的密度来接种细胞。

8. 加足够的间充质干细胞的完.全培养液,在37℃,5% CO2和 相对湿度的培养箱中培养。

中文名称：HY STEMCEL MSC细胞无血清培养基 现货供应

英文名称：CCGmHuM® E8 Cocktail human MSCs Serum-Free Medium

货号：E8725F

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