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全功能免疫印迹（WB）实验代测

全功能免疫印迹（WB）简介：

免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测，可以同时比较多个样品同种蛋白的表达量差异。

全功能免疫印迹（WB） 原理：

通过SDS-PAGE凝胶将细胞或生物样品内的蛋白按照蛋白分子量从大到小规律分离开。经过PAGE 分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜或PVDF膜).上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应(目前主要用HRP标记的第二抗体) , 经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分(目前主要使用鲁米诺和二抗中的HRP 反应发出荧光,通过仪器或者胶片显色)。该技术广泛应用于检测蛋白水平的表达。

全功能免疫印迹实验说明：

1、客户需提供新鲜冰冻组织/细胞/血浆/外泌体/其他体液及一抗)

2、每张膜（1-8个样品，一个抗体）

全功能免疫印迹（WB）实验操作流程：

1、细胞及组织蛋白质抽提；

2、蛋白质定量；

3、变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)；

4、蛋白质转膜；

5、膜的封闭；

6、一抗、二抗孵育；

7、结果检测：化学发光法检测，X 胶片曝光显影；

8、数据分析；

全功能免疫印迹（WB）实验代测