彗星实验，单细胞凝胶电泳实验检测服务 返回列表页

信帆生物提供：彗星实验，单细胞凝胶电泳实验检测服务

服务介绍：彗星实验（Comet Assay），也称为单细胞凝胶电泳实验（Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE），是一种用于检测细胞DNA损伤的分子生物学技术。该实验因其在显微镜下观察到的DNA迁移图案形似彗星而得名。彗星实验广泛应用于毒理学、环境科学、放射生物学和癌症研究等领域，用于评估化学物质、辐射或其他因素对DNA的损伤。
检测原理：
当细胞受到外部因素（如辐射、重金属暴露、化学物质等）影响时，细胞内的DNA可能出现单链或双链断裂。在中性或碱性条件下，细胞经过裂解、解旋和电泳等步骤后，损伤的DNA断链及片段会离开核DNA向阳极移动，形成彗星状的图像。DNA受损越严重，产生的断片越多且片段越小，电泳时迁移的DNA量也就越大，迁移距离越长。在荧光显微镜下，可以观察到尾长增加、尾部荧光强度增强。在一定条件下，DNA迁移距离（彗星尾长）和DNA含量（荧光强度）分布与DNA损伤程度呈线性相关。
实验步骤：
1、单细胞悬液制备：将细胞调整为适当的浓度，用于后续的制胶步骤。
2、制胶：在载玻片上制备三层胶，第一层为正常熔点琼脂糖，用于使第二层平整和附着紧密；第二层为含有细胞的低熔点琼脂糖，用于固定细胞；第三层为低熔点琼脂糖，对第二层细胞起保护作用。
3、细胞裂解：将载玻片浸入细胞裂解液中，溶解细胞膜及核膜，除去蛋白质、RNA等，仅存留核骨架。
4、DNA碱解旋：将载玻片置于碱性电泳缓冲液中，使DNA在碱性条件下解螺旋形成单链DNA，并使DNA断链在电泳场中易于迁移。
5、单细胞电泳：在适当的电压和电流条件下进行电泳，使损伤的DNA断链及片段向阳极移动。
6、中和与染色：电泳完毕后，用中和液处理载玻片，然后用荧光染料（如溴化乙锭）对DNA进行染色。
7、镜检和图像分析：在荧光显微镜下观察并拍照电泳图谱，利用图像分析软件对彗星图像进行指标分析，如彗星全长、尾长、尾矩和Olive尾距等。
注意事项：
1、细胞活性：确保细胞在处理过程中保持活性，避免人为损伤。
2、实验条件：严格控制电泳时间、电压和缓冲液pH，以确保结果的可重复性。
3、数据分析：使用标准化软件分析彗星图像，避免主观误差。
4、对照设置：设置阳性和阴性对照，确保实验结果的可靠性。

彗星实验，单细胞凝胶电泳实验检测服务 仅供科研实验用，不做其他用途！