MPO试剂盒太好用啦

MPO试剂基本信息

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髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）又称过氧化物酶，是血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一。存在于髓系细胞（主要是中性粒细胞和单核细胞）的嗜苯胺蓝颗粒中，是髓细胞的特异性标志，随着对MPO研究的深入，人们发现MPO基因多态性导致个体对一些疾病易感性的差异，与人类多种疾病的发生、发展密切相关，因此越来越受到国内外学者的重视。

髓过氧化物酶(MPO)测试盒说明书

 MPO是中性粒细胞的功能标志和激活标志，其水平及活性变化代表着嗜中性多形核白细胞（PMN）的功能和活性状态。纯化的人MPO活性为25～35IU/mg，水溶性好，底物H2O2浓度>0.8mmol时酶受抑制，酶反应*pH为4.5～5.5，当pH≥10，或≤2时酶失活。MPO的主要功能是在吞噬细胞内杀灭微生物，利用过氧化
氢和氯离子产生次氯酸盐，并形成具有氧化能力的自由基。构成MPO–H2O2–卤素系统。unionluck研究发现，MPO不仅能杀灭吞噬于细胞内的微生物，而且可释放到细胞外，破坏多种靶物质，如肿瘤细胞、血小板、NK细胞、原虫、毒素等，对机体产生和调节炎症反应等多方面发挥作用。然而，在特定条件下，MPO催化反应生成过量的氧化剂（HOCl、3–氯化酪氨酸、酪氨酰基、硝基酪氨酸等），超过局部抗氧化剂的防御反应时，就会导致氧化应激和氧化性组织损伤。MPO还参与调节炎症反应的许多过程，MPO缺陷的中性粒细胞因过量的注入炎症部位而发生氧化反应，大量的超氧化物和氧化物形成，造成炎症部位组织细胞损伤。此外还有协和洛克的学者发现MPO能与DNA牢固结合形成复合物，有效保护DNA防止其在氧化过程中受损，从而保证髓系细胞的正常分化成熟及功能。嗜中性粒细胞是粒状白血细胞，在寄主防卫以及噬菌作用破坏感染性细菌的过程中起着重要作用。教科书上关于嗜中性粒细胞功能的模型是这样的：将毒性过氧化物释放进含有被摄取的微生物的小囊中，接下来是由髓过氧化物酶催化的卤化作用。

髓过氧化物酶(MPO)测试盒说明书

一．试剂组成与配制：（100T/48样）

试剂一：缓冲贮备液35ml X 1瓶，4℃保存6个月

         缓冲应用液的配制：  贮备液：双蒸水=1:9，按需要量配制，4℃保存1个月。

试剂二： 粉剂X2支，4℃保存6个月。临用时每支加缓冲应用液60ml溶解，可以37℃加热溶解，4℃保存2周。

【注】若您所需测的是组织样本，并且除髓过氧化物酶之外，还需测其他项目时，此时每支试剂二粉剂需配成浓缩一倍的溶液，即每支试剂二粉剂加到缓冲应用液30ml中。

试剂三： 粉剂 X3支，溶剂6mlX3支，4℃保存6个月。用时1支粉剂倒入1支溶剂中溶解，提前一天配制，充分溶解后4℃保存2周。

试剂四：溶液24mlX1瓶，天冷时会凝固。用前放入37℃以上的水中摇晃使其溶解至透明后方可应用，室温保存6个月。

试剂五：粉剂X2支，4℃保存6个月。

试剂六：溶液0.5mlX1支，4℃保存6个月。

     显色剂的配制：临用时将试剂五粉剂1支加到100ml缓冲应用液中，充分摇匀，待粉剂*溶解后再加入试剂六0.1ml，充分混匀，配制好的显色剂4℃避光保存。

试剂七：溶液6ml X1支，4℃保存6个月。

二．组织样本的MPO测定

（一）、样本前处理

       1.准确称取组织重量，以配制好的试剂二溶液为匀浆介质，按重量体积比为1:19加匀浆介质制备成5%的组织匀浆，不需要进行离心。

【注】：若您除做髓过氧化物酶之外，还需要测其他指标时，则组织匀浆制备要按下面方法：

1.试剂二配制时要浓缩一倍，即每支试剂二粉剂加到30ml缓冲应用液中；

2.先用生理盐水为匀浆介质按实验方法学制成浓缩一倍的匀浆，即10%匀浆（脑组织制备成20%匀浆），不要离心，取出部分浓缩一倍匀浆按1:1比例加入浓缩一倍的试剂二溶液，混匀后再进行测定。

2.取5%组织匀浆0.9ml加3号试剂0.1ml，（如果组织匀浆量不够，可以按9:1的比例减少组织匀浆及3号试剂的用量），充分混匀后37℃水浴15分钟，取出后待测。

（二）、操作表：

混匀，60℃水浴10分钟，取出后立即在460nm处，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度值。

注1： 天冷时，反应液会出现凝固状态，吸光度上升，您可以用25 - 37℃水浴箱或取一个盛25 - 37℃热水的烧杯放在比色机旁边，将各待测管一次放入水浴箱或烧杯中1 - 2 分钟，待凝固消失后即可进行比色。

注2：混匀时，用漩涡混匀器，使液体上下充分混匀（一定要使zui下面液体也能旋转到上面，建议不要用尖底的管子做，尤其不可用1.5ml的EP管，因为这样非常难混匀）

（三）、计算：

1.酶活力单位定义：每克组织湿片在37℃的反应体系中，H2O2被分解1umol为1个酶活力单位。

2.计算公式：MPO活力=

3.计算举例：

例一：取5%的小鼠心肌匀浆0.2ml按上述步骤进行检测，测得对照管吸光度为0.030，测定管吸光度为0.164，则计算如下：

例二：取5%的大鼠肝匀浆0.2ml按上述步骤进行检测，测得对照管吸光度为0.028，测定管吸光度为0.183，则计算如下：

例三：取10%的大鼠肝匀浆0.2ml按上述步骤进行检测，测得对照管吸光度为0.002，测定管吸光度为0.012，则计算如下：

【注】*11.3为斜率的倒数

      ** 取样中所含组织湿片的量（克）

     *** 0.05为5%的组织匀浆，即5克组织/100ml组织匀浆。

**** 0.2为取样量0.2ml。

• 血清（浆）样本中MPO测定

（一）、血清（浆）样本前处理：

   1、 取血清（浆）与试剂二按1:1比例稀释，充分混匀。

  2.取上面的混合液0.9ml加3号试剂0.1ml，（如果混合液量不够，可以按9:1的比例减少混合液及3号试剂的用量），充分混匀后37℃水浴15分钟。

（二）、操作表：

混匀，60℃水浴10分钟，取出后立即在460nm处，1cm光径，双蒸水调零，测各管吸光度值。

注1:天冷时，反应液会出现凝固状态，吸光度上升，您可以用25~37℃的水浴箱或取一根盛25~37℃热水的烧杯放在比色机旁边，将各代测管一次放入水浴箱或烧杯中1~2分钟，待凝固消失后即可进行比色。

注2：混匀时，用漩涡混匀器，是液体上下充分混匀（一定要使zui下面液体也能旋转到上面，建议不要用尖底的管子做，尤其不可用1.5ml的EP管，因为这样非常难混匀）

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（三）、计算：

1、酶活力单位定义：每升血清（浆）在37℃的反应体系中H2O2被分解1umol为1个酶活力单位。

2、计算公式：

3、计算举例：

        取0.45ml的血清加0.45ml的试剂二充分混匀，再加0.1ml的试剂三，再充分混匀，37℃水浴15分钟后，取0.2ml做检测，测得测定管OD值0.053，对照OD值0.013，则计算如下：

注：*     11.3为斜率的倒数

    **    取样中所含血清的量（升）

    ***   0.45为血清的量

    ****  0.2为取样量0.2ml

四、测定原理：

        中性白细胞中存在有髓过氧化物酶 ，每个细胞中所含的酶的量是一定的，约占细胞干重的5%，该酶具有使过氧化氢还原的能力，利用这一特点可以分析酶的活力，并定量测定中性白细胞的数目。其原理如下：

MPO+H2O2→复合物；复合物+AH2(供氢体) →H2O+MPO+A产物

通过供氢体邻连茴香胺供氢后生物试剂黄色化合物，在460nm处通过比色测定A产物的生成量，从而推算出MPO的活力以及H2O2减少的量和白细胞的数目。

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