RT-PCR检测服务,实时荧光定量PCR检测服务
上海信帆生物专业代做RT-PCR实验,荧光定量PCR技术是普通PCR技术的改良和发展,它提高了普通PCR技术的特异性和准确性,能做到实时监控和准确定量,广泛应用于基础研究、研究检验、海关商贸检疫等各个领域。
1.技术优势:
*灵敏度高,可以检测低拷贝的目的基因
*高精度,PCR扩增阶段包括3个阶段:指数增长期,线性增长期和平台期,96个重复指数增长期表现出高精度,而平台期则变化差异较大
*定量能力强,简单的流程就能得到高质量的定量数据
*动力学范围宽,可以定量9个数量级的差异,速度快,节省时间和劳力,不需要电泳检测
*安全,使用荧光染料发光,不用EB或放射性物质,极大降低对实验人员健康的威胁
*重复性好
2.检测方法
(1) SYBR Green Ⅰ
游离状态下的SYBR Green分子发出微弱的荧光信号,当与dsDNA双螺旋小沟区域结合时,则发出绿色荧光,可在520nm波长下检测荧光信号,荧光信号的强度与dsDNA数量呈正相关。
SYBR Green Ⅰ染料法的特点:
高灵敏度,低背景信号,操作简单,不影响酶促反应,价格便宜。
(2)探针法:TaqMan荧光探针,MGB探针
TaqMan 荧光探针是一种寡核苷酸探针,荧光基团连接在探针的5`末端,一般用FAM、VIC、HEX、Cy3、Cy5等荧光基团,而淬灭剂则在3`末端,一般为TAMRA、BHQ1、BHQ2等,其中TAMRA发出黄色荧光,BHQ1和BHQ2不发出荧光。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。
TaqMan-MGB探针与普通TaqMan荧光探针相比具有更短的序列和更高的序列特异性,常被用于SNP分型的研究中,有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。
RT-PCR检测服务,实时荧光定量PCR检测服务
探针法的特点:
与染料法相比具有更低的背景信号,更高的灵敏度,可以检测低于10个分子的模板,更高的特异性,结果也更准确。同时也具有染料法的操作简单,不影响酶促反应等优点。
3.检测周期
常规检测任务2-3周内完成,具体时间根据要检测的基因和样本数而定
4.报告内容
提供电泳图片,引物调试与样本扩增相关图片(扩增曲线/溶解曲线/标准曲线),定量PCR导出的原始数据,结果的初步汇总分析以及实验报告;
5.送样要求
1、组织样本在取样后,迅速放入Trizol或RNA保存液中;
2、细胞请用培养基,Trizol或RNA保存液;
3、RNA保存液保存的样本可冰袋运输;其它保存条件请干冰运输。
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