化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒现货供应

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化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒

化学发光法生物素检测试剂盒(Chemiluminescent Biotin-labeled Nucleic Acid Detection Kit)是一种通过Streptavidin-HRP及后续的BeyoECL Moon试剂来实现化学发光检测Biotin标记核酸的检测试剂盒。适用于Southern blot、Northern blot、ribonuclease protection assay (RPA)或EMSA等实验中，采用生物素标记的DNA或RNA探针时的检测。本试剂盒不适用于生物素标记蛋白的检测。
      本试剂盒同时还提供了封闭液、洗涤液等检测时所需的配套试剂。
      本试剂盒采用了高质量的Streptavidin-HRP Conjugate，HRP和Streptavidin共价交联的比例大于3，这样比采用
Streptavidin和Biotin-HRP conjugate两种试剂进行检测要更方便，并且灵敏度更高。
      采用了非特异性结合比avidin更低的strepatavidin，使检测结果背景更低灵敏度更高。
      本试剂盒没有提供生物素探针标记相关的试剂，生物素标记的DNA探针或EMSA探针的制备可以相应地使用本公司提供的的生物素3'末端DNA标记试剂盒或EMSA探针生物素标记试剂盒。
      本试剂盒可以用于检测至少10块10 x 10cm有生物素标记EMSA探针的膜，即共1000cm²。

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包装清单：

使用说明：

1. 在使用Biotin标记探针的情况下，完成Southern、Northern杂交及后续洗涤后，或RPA的转膜和交联后，或EMSA的转膜和交联后，可以使用本试剂盒开始检测。下面的检测过程中溶液的用量是用于一片10x10cm膜的量。如果膜较大或较小，各溶液的用量可以按比例放大或缩小。

2. 37-50℃水浴溶解封闭液和洗涤液。

注意：封闭液和洗涤液必须*溶解后方可使用，封闭液和洗涤液可以在室温至50℃之间使用，但必须确保这两种溶液中均无沉淀产生，在冬天需特别注意。

3. 取一合适的容器加入15ml封闭液，再放入交联过的含有样品的尼龙膜。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。

4. 取7.5μl Streptavidin-HRP Conjugate加入到15ml封闭液中(1:2000稀释)，混匀备用。

5. 去除封闭液，加入上一步中配制的15ml含有Streptavidin-HRP Conjugate的封闭液。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。

6. 取25ml 洗涤液(5X)，加入100ml重蒸水或Milli-Q级纯水，混匀配制成125ml洗涤液。

7. 将尼龙膜转移至另一装有15-20ml洗涤液的容器内，漂洗1分钟。

8. 去除洗涤液，加入15-20ml洗涤液，在侧摆摇床或水平摇床缓慢上洗涤5分钟。

9. 重复步骤8三次(共洗涤四次)，每次洗涤时间均约为5分钟。

10. 将尼龙膜转移至另一装有20-25ml检测平衡液的容器内，在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动5分钟。

11. 取5ml BeyoECL Moon A液和5ml BeyoECL Moon B液混匀，配制成BeyoECL Moon工作液。注意：BeyoECL Moon工作液必须现配现用。说明：从本步骤起操作方法和注意事项同Western实验的荧光检测。

12. 取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。立即将膜的样品面向上，放置到处于水平桌面上的洁净容器内或保鲜膜上。

13. 在尼龙膜的表面小心加上步骤11配制好的共10ml BeyoECL Moon工作液，使工作液*覆盖尼龙膜。室温放置2-3分钟。

14. 取出尼龙膜，用吸水纸吸去过多液体。将尼龙膜放在两片保鲜膜或其它适当的透光薄膜中间，并固定于压片暗盒(也称片夹)内。

15. 用X光片压片1-5分钟。可以先压片1分钟，立即显影定影，然后根据结果再调整压片时间；也可以直接分别压片30秒、1、3、5分钟或更长时间，然后一起显影定影观察结果。

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常见问题：

1. 背景较高。

可能是由于封闭液或洗涤液中出现沉淀或混浊。解决方法是参考使用说明，加热封闭液和洗涤液使封闭液和洗涤液*溶解。

2. 出现斑点状背景。

可能是由于过长时间存放导致Streptavidin-HRP Conjugate中出现沉淀，解决方法是12000-14000g离心1分钟再吸取近液面的Streptavidin-HRP Conjugate。转膜时有气泡也会导致斑点状背景产生，解决方法是转膜时胶、膜、滤纸之间确保没有气泡。

3. 没有条带或信号很弱。

A. 探针标记效率太低，解决方法是检测探针标记效率，确保探针的标记效率较高。

B. 探针用量不足或样品量不足，解决方法是加大探针用量或加大样品用量。

C. 样品中待检测的核酸降解，解决方法是检测待检测的核酸样品是否出现降解，如降解则须制备新的样品。

D. 转膜效果不佳，解决方法是检查转膜的方法和步骤，使用预染的标准品作为转膜的对照。

E. 选择了不适当的膜，尽管不少情况下硝酸纤维素膜也可以完成检测，请优先选择带正电荷的尼龙膜。

F. 检测过程中膜干掉了，解决方法是确保检测过程中膜可以被液体覆盖或始终保持湿润。

G. 没有交联或交联效果不佳，解决方法是进行适当的交联，如果交联效果不佳则须检测交联的效率。

H. 洗涤液(5X)没有稀释就直接使用，请把洗涤液(5X)稀释至1X后再使用。

I. X光片曝光时间不足，解决方法是适当延长曝光时间。

保存条件：
      3308-3 Streptavidin-HRP Conjugate在-20℃保存，其余可4℃保存。如果长期不用，整个试剂盒可-20℃保存，-20℃可以保存更长时间。
      本产品于专业人员的科学研究用，不得用于研究诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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