土壤总磷/有机磷/无机磷含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
规格: 50T/24S
试剂组成和配制：
试剂一：液体 50mL×1
瓶，4℃保存。临用前用蒸馏水稀释 10 倍后再用。
试剂二：液体 11mL×1
瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入 20 mL 蒸馏水，充分溶解后加入 10 mL
试剂二，混匀。
标准品：液体 1mL×1 支，40 μg/mL 无机磷标准品，4℃保存。
产品说明：
土壤总磷包括有机磷和无机磷，其中无机磷能够直接被植物利用。土壤有机磷经过矿化分解而
转化为无机磷。同时测定土壤总磷、有机磷和无机磷，可以全面反映土壤磷营养状况。
利用钼蓝法定磷。取一份土样，通过浸提法测定土壤无机磷含量；另外取一份土样，经高温灼
烧后，土壤有机磷转化为无机磷，测得土壤总磷含量；总磷含量减去无机磷含量，即可计算出有机
磷含量。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式水浴锅，分析天平、可调式移液器、550℃高温电炉，
1mL 玻璃比色皿、蒸馏水、100 目筛子（可更小）。
操作步骤：
一、土壤不同形态磷提取：
1.
无机磷：称取通过 100 目筛子的风干土样 0.1g，转移到
10 mL 离心管，加入 10mL 试剂一，
震荡混匀，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm，25℃离心
10min，取上清液一，用于无机磷含量
测定。
2.
总磷提取：取通过 100 目筛子的风干土样，550℃灼烧 1h，冷却后称取约 0.1g，转移到 10 mL
离心管，加入 10mL 试剂一，震荡混匀，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm，25℃，离心 10min，
取上清液二，用于总磷含量测定。
二、测定步骤：
1.
分光光度计预热 30 min，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。
2.
打开水浴锅，调节温度到 40℃。
3.
空白管：取 EP 管，依次加入 500µL 蒸馏水，500μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，
室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。
4.
标准管：取 EP 管，依次加入 50µL 标准液，450µL 蒸馏水，500μL 试剂三，混匀后置于 40℃第 2页，共 2 页
水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为
A 标准管。
5. 测定管：取
EP 管，依次加入 50µL 上清液一或者上清液二，450µL
蒸馏水，500μL 试剂三，
混匀后置于
40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm
测定吸光度，记为 A 测
定管。
注意：空白管和标准管只需测定一次。
三、土壤磷含量计算：
1.
土壤无机磷含量（μg /g）=[C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A
标准管－A 空白管)]×V
总÷W =400×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W
C 标准液：40μg/ml；W：土壤样品质量，g；V 总：上清液一总体积，10 mL。
2.土壤总磷含量（μg /g）=[C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷
W=400×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A
空白管)÷W
C
标准液：40μg/ml；W：土壤样品质量，g；V
总：上清液二总体积，10 mL。
3.
土壤有机磷（μg /g）=土壤总磷-土壤无机磷
注意事项：
试剂三配制过程中，可能会产生黑色固体，其不影响结果，注意吸取时不要将黑色固体吸入。
