柠檬酸测定试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
测定意义?
CA 是生物体内常见的有机酸?是重要的食品风味物质??外?CA 是?羧酸循??反
应的产物?
测定原理?
酸性条件??柠檬酸还原 Cr 6+ 生成 Cr 3+ ?在 545nm 处有特征吸收峰?通过测定 545nm 吸光
值的增加?即可?算出样品中柠檬酸含??
自备仪器和用品?
可见分光光度??低温离心机?水浴锅?可调式移液枪?1mL 玻璃比色皿和蒸馏水?
试剂组成和配置?
试剂一?液体×1 瓶?4℃保存?
试剂??液体×1 瓶?4℃保存?
试剂??液体×1 支??20℃保存?
试剂四?粉剂×1 瓶?室温保存?临用前配制?加入 5mL 试剂一?充分溶解?
试剂五?液体×1 瓶?4℃避光保存?
标准品?液体×1 支?250µmol/L 柠檬酸标准液?4℃保存?
样品中柠檬酸提取?
1. 液体样品中柠檬酸提取?取 0.1mL 液体加试剂一 0.9mL?充分混匀?11000g? 4℃离心
10min?取?清液?待测?
2. 组?中柠檬酸提取?按照组?质??g??提取液体?(mL)为 1?5~10 的比例?建议?取
约 0.1g 组??加入 1mL 试剂一?进行冰浴匀浆?11000g?4℃离心 10min?取?清置冰
?待测?
3. 线粒体中柠檬酸提取?按照组?质??g??提取液体?(mL)为 1?5~10 的比例?建议?
取约 0.1g 组??加入 1mL 试剂一?进行冰浴匀浆?600g/min?4℃离心 5min?取?清?
另一 EP 管中?11000g?4℃离心 10min?弃?清 ???清液可用于?胞质 CA ? 含?测定??
向沉淀中加试剂? 200µl?以及试剂? 2µl?充分悬浮溶解?11000g?4℃离心 10min?
取?清液?待测

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