神经肽 Y 放免药盒操作说明书

神经肽 Y(Neuropetide NPY)是一种含有 36 个氨基酸残基的多肽。广泛分布于哺乳动物的中
枢神经系统。NPY 可收缩血管，升高血压，对心脏表现为负性肌力作用。近有作者证实血小
板有合成 NPY 的能力。NPY 含量与应激反应程度有关，当出血性休克时，NPY 释放增加对维
持全身血压稳定和调节器官血流量具有重要的代偿作用。研究各种病理状态血浆及血小板 NPY
含量与释放的改变及其病理生理意义，对心脑血管疾病的防治具有广阔的研究前景。
测定盒组成：
1、缓冲液一瓶。
2、分离剂（第二抗体）一瓶。
3、NPY 抗体一瓶，用前加 ml 缓冲液稀释。
4、NPY 标记一瓶，用前加 ml 缓冲液稀释。
5、NPY 标准品五瓶：用前每瓶加 ml 缓冲液稀释 33、100、300、600、1200pg/ml。
6、抑肽酶一瓶。
7、10%EDTA.Na2 一瓶。
样品收集：
1、取静脉血 3ml 注入含 10%EDTA.Na2 40ul 和抑肽酶 10ul（含 100U/ml 以上）的试管中，
混匀 4℃，3000 转/分 离心 10 分钟，分离血浆（溶血样品影响测定结果）。如需要可分装 2-3
份保存，放-20℃可保存 2 个月，在-70℃以下可存放半年。 测定前，使样本置于室温或冷水中
复融，再次 4℃，3000 转/分 离心 5 分钟，取上清测定。
2、组织样品的处理：取出活组织，吸去血迹，称重，放入 0.2mol/L 1N HAC 1ml 中，然后
在 100℃水浴中煮沸 10 分钟，匀浆。4℃，3000 转/分 离心 15 分钟，取上清放-20℃以下保存，
测定时用 PBS 五倍以上稀释，以调节 PH 值。另外，每种组织的样品非特异结合（U 0 ）可能有
差异，每份标本单独做一个 U 0 。取组织的重量视不同组织而异。
3、血浆样品处理：实验结果发现：有少数患者可能由于使用某些药物或个体差异，出现血浆
蛋白对抗原抗体反应的影响，测定 NPY 值偏低，甚至为零。为排除样品中蛋白质的干扰，可采
用简易酸性乙醇提取法，
具体步骤如下：
取血浆 0.5ml+1ml 酸性无水乙醇（ 100ml 无水乙醇+冰乙酸 1.2ml），放振荡器上振荡 1min，4℃，
3500rpm/15min 离心 15min，将上清液倒入青霉素瓶，在 45℃水浴锅上蒸干（可将水浴锅温
度调到 80℃左右，锅口上放一铝板，铝板上温度约 40~45℃，将青霉素瓶置于铝板之上），大
约需 24 小时样品可以*干燥，干燥后将青霉素瓶加盖，封口，放-20℃保存。
测定前，每瓶加 PH7.4 PBS 0.5ml 溶解，混匀，倒入塑料管中，放-20℃ 4h 以上至样品*
冻结，然后取出放置 4℃*溶解，取上清 200ul 测定用。
注：从 4℃取出后，一定要轻拿轻放，千万不要再振荡混匀，不要在室温放置过久，zuihao现加现
取。