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354次蛋白实验中的常见问题
1、蛋白样品不能反复冻融；
2、蛋白样品应加蛋白酶抑制剂，以增加蛋白的稳定性；
3、细胞水平要做 Western Blot，一般地 5×106 个细胞提取的蛋白够就足 Western Blot；
4、如果目标蛋白是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，建议提取后加上 NaF 去抑制磷酸化酶的活性；
5、若转膜不*，可以加大上样量，还有转移时你可以用降低电流延长时间，转膜液中甲醇的比例多加 5－10％；
6、如果上样量超载，可以浓缩样品，也可以根据你的目标分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地，超载 30％是不会有问题的。如果已经超了不少了，而且小分子量的也要，可以考虑加大胶的厚度，可以试试 1.5mm 的 comb；
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